卡马西平及七十味珍珠丸对大鼠海马CA1区、顶叶皮质区神经细胞凋亡的影响

摘要

目的:卡马西平(Carbamazepine，CBZ)又称为酰胺咪嗪。与三环类抗抑郁药结构相似，但没有抗抑郁的活性。于二十世纪七十年代应用于临床，作为广谱抗癫痫药物之一，是精神运动性癫痫发作的首选用药，对其他全身阵挛—强直型发作、混合型发作的癫痫也有一定疗效。由于其价格低廉，疗效显著，临床应用非常广泛。但是卡马西平口服易发生药物的不良反应，且个体间不良反应差异较大，可累及多个系统及器官，临床表现多种多样，其中神经系统不良反应的发生率较高，出现嗜睡、构音不良、步态不稳、语言障碍、意识障碍、小脑性共济失调、头晕、中毒至癫痫持续状态、偏身抽搐—偏瘫综合征等;此外，该药对心血管系统、血液系统、消化系统、肝胆、泌尿系统、呼吸系统也产生影响，严重时造成死亡。
　　 七十味珍珠丸(Rannasangpei，RNSP)，是具有代表性的名贵珍宝藏药之一，是在二十五味珍珠方基础上制成的。该药由佐台、九眼石、玛瑙、珊瑚、西红花、天竺黄、甘草、降香、檀香、珍珠等70味草药炮制而成。具有醒脑开窍，调和气血，通经活络，安神、镇静之功效。是癫痫、小儿抽搐、植物神经功能紊乱等神经系统病症及中风、脑溢血、半身不遂等急慢性脑血管病的常用藏药之一，疗效显著，且没有明显的不良反应，具有一定程度的神经保护作用。
　　 本实验主要通过观察卡马西平及七十味珍珠丸常规剂量对大鼠海马CA1区、顶叶皮质区神经细胞凋亡的影响，探讨卡马西平对神经系统毒副作用以及七十味珍珠丸治疗神经系统病症的可能作用机制，为更好地指导临床用药，减少药物不良反应的发生提供理论依据。
　　 方法:
　　 1实验动物及分组:健康雄性（10周龄）SPF级Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，体重(200±20)g。按照随机方法平均分成4组，每组分为2个亚组，每个亚组5只。分组如下:①生理盐水组(NS组):生理盐水短疗程组(N1组);生理盐水长疗程组(N2组);②CBZ组:CBZ短疗程组(C1组）;CBZ长疗程组（C2组）;③RNSP组:RNSP短疗程组(R1组);RNSP长疗程组(R2组);④CBZ+RNSP组:CBZ+RNSP短疗程组(M1组);CBZ+RNSP长疗程组(M2组)。
　　 2药物干预:CBZ组以CBZ400mg/kg/d溶于生理盐水(1ml/100g)分别灌胃15天和30天;RNSP组以RNSP250mg/kg/d溶于生理盐水(1ml/100g)分别灌胃15天和30天;CBZ+RNSP组以CBZ400mg/kg/d和RNSP250mg/kg/d溶于生理盐水(1ml/100g)分别灌胃15天和30天;生理盐水组灌注等量生理盐水(1ml/100g/d)。
　　 3灌注及取材:10％的水合氯醛麻醉大鼠，仰卧固定，开胸暴露心脏，灌注针经心尖部进入左心室—主动脉瓣—升主动脉，同时剪开右心耳放血，先快速注入生理盐水，见右心耳流出无色液体后应用4％的多聚甲醛固定，待灌注成功后立即断头取材大鼠脑组织，放入4％的多聚甲醛固定液中进行固定。标本经过脱水、透明、石蜡包埋及切片，供凋亡指标测定使用。
　　 4凋亡指标测定:大鼠海马CA1区及顶叶皮质区石蜡切片经HE染色光镜下观察大鼠脑组织的形态学变化，以整体观察大鼠脑的功能状态。免疫组化染色法观察凋亡相关基因bax及bcl-2的表达情况。原位末端标记法(TUNEL法)检测标本内神经细胞的凋亡情况。
　　 5统计学处理:应用SPSS13.0软件对数据进行处理。多组间均数显著性检验应用One-WayANOVA，各组间均数两两比较采用SNK检验，当P＜0.05时认为差异具有显著性。
　　 结果:
　　 1HE染色结果
　　 1.1海马CA1区:生理盐水组及RNSP组脑组织结构清晰完整，细胞密集，排列整齐。CBZ组可见细胞排列紊乱，细胞皱缩，体积缩小，与周围细胞分离，胞质致密，嗜酸性染色增强，细胞核、染色质聚集成团块状。其中，CBZ长疗程组此现象尤为明显。CBZ+RNSP组可见散在分布的凋亡细胞。
　　 1.2顶叶皮质区:各组可见细胞密集，排列整齐，偶见细胞体积缩小及染色质聚集成团块状，与生理盐水组相比，无明显形态学差异。
　　 2免疫组化染色法检测Bax和Bcl-2表达结果
　　 2.1Bax表达结果
　　 2.1.1海马CA1区:CBZ组均可见Bax的高表达，其中CBZ长疗程组此现象尤为明显;CBZ+RNSP组可见Bax中等表达;生理盐水组和RNSP组可见Bax少量表达。对Bax表达阳性细胞的平均光密度值(AO值)进行统计学分析得出:CBZ组AO值明显高于生理盐水组，CBZ+RNSP组AO值低于CBZ组，高于生理盐水组，各组之间相比差异具有统计学意义(P＜0.05);CBZ长疗程组AO值高于短疗程组，两者相比差异具有统计学意义(P＜0.05);RNSP组与生理盐水组AO值相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　 2.1.2顶叶皮质区:各组均可见Bax表达，表达量较低，各组AO值相比，差异均无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2.2Bcl-2表达结果
　　 2.2.1海马CA1区:生理盐水组与RNSP组Bcl-2表达明显，CBZ+RNSP组Bcl-2中等表达，CBZ组Bcl-2少量表达。对Bcl-2表达阳性细胞的AO值进行统计学分析得出:CBZ组AO值明显低于生理盐水组，CBZ+RNSP组AO值高于CBZ组，低于生理盐水组，各组之间相比差异具有统计学意义(P＜0.05);CBZ长疗程组AO值低于短疗程组，两者相比差异具有统计学意义(P＜0.05);RNSP组与生理盐水组AO值相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2.2.2顶叶皮质区:各组均可见Bcl-2表达，表达量较高，各组AO值相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。
　　 3原位末端标记法（TUNEL法）检测结果
　　 3.1海马CA1区:CBZ组可见凋亡细胞数目增多，CBZ+RNSP组可见散在分布的凋亡细胞，生理盐水组和RNSP组偶见凋亡细胞。对各组凋亡细胞阳性率进行统计学分析得出:CBZ组凋亡率明显高于生理盐水组，CBZ+RNSP组凋亡率低于CBZ组，高于生理盐水组，各组之间相比差异具有统计学意义(P＜0.05);CBZ长疗程组凋亡率高于短疗程组，两者相比差异具有统计学意义(P＜0.05);RNSP组与生理盐水组凋亡率相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 3.2顶叶皮质区:各组可见稀疏、散在分布的凋亡细胞，各组凋亡细胞阳性率相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。
　　 结论:
　　 1灌服常规剂量卡马西平及七十味珍珠丸，对正常成年SD大鼠顶叶皮质区Bax、Bcl-2表达及神经细胞凋亡无明显影响;
　　 2灌服常规剂量卡马西平可引起正常成年SD大鼠海马CA1区Bax表达明显增高，Bcl-2表达降低，造成神经细胞过度凋亡，且用药时间越长，凋亡程度越重;灌服常规剂量七十味珍珠丸对正常成年SD大鼠海马CA1区Bax、Bcl-2表达及神经细胞凋亡无明显影响;
　　 3卡马西平及七十味珍珠丸联合应用，七十味珍珠丸降低了卡马西平导致的大鼠海马CA1区Bax的高表达及Bcl-2的降低，对神经细胞过度凋亡有抑制作用，提示七十味珍珠丸的神经保护作用机制可能与抑制细胞过度凋亡有关。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 HE染色结果

2 免疫组化染色法检测Bax及Bcl-2表达结果

3 TUNEL法检测结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历