基于液质联用技术的金钱草与广金钱草化学成分比较及广金钱草的药动学和排泄动力学研究

摘要

金钱草为报春花科珍珠菜属植物过路黄LysimachiachristinaeHance的新鲜或干燥全草，广金钱草为豆科植物广金钱草Desmodiumstyracifolium(Osb.)Merr.的干燥地上部分，均为常用传统中药。《中国药典》将金钱草与广金钱草分别进行收载，但两者的药理作用类似，例如都具有抗炎、清火退热、利尿等作用。临床上金钱草与广金钱草的混淆使用现象较为常见。
　　 本研究建立了简单、灵敏、可靠的液质联用(LC-MS/MS)方法同时测定金钱草与广金钱草中15种黄酮和3种酚酸类成分，用于不同产地的16批金钱草与21批广金钱草药材的比较与评价，为金钱草与广金钱草的质量控制提供了有效分析方法。
　　 为更好的为临床应用提供指导，本文分别建立了LC-MS/MS法测定灌胃给予大鼠广金钱草提取物后血浆中4种黄酮和1种酚酸类成分的定量分析方法及胆汁中7种黄酮和1种酚酸类成分的定量分析方法，获得了广金钱草中主要有效成分的药代动力学参数，阐明了其经胆汁排泄的动力学过程。
　　 第一部分基于液质联用技术的金钱草与广金钱草主要化学成分含量的比较研究
　　 目的:建立LC-MS/MS方法同时测定金钱草及广金钱草药材中15种黄酮和3种酚酸类成分，并结合多重线图与聚类分析对金钱草及广金钱草进行比较。
　　 方法:采用电喷雾离子化源(ESI)及多反应离子监测(MRM)模式进行负离子检测。源喷射电压(IS)为-4500V;雾化温度为650℃;雾化气(GS1，N2):4.14×105Pa;辅助气(GS2，N2):4.48×105Pa;气帘气(N2):1.72×105Pa。18种被测成分的监测离子对分别为152.9/108.9(原儿茶酸)、353.1/191.0（绿原酸）、193.0/133.9（阿魏酸）、300.9/150.9(槲皮素)、609.0/299.9(芦丁)、284.9/92.8(山奈酚)、271.1/150.9(柚皮素)、315.0/150.9鼠李素）、255.0/118.9(甘草素)、269.0/116.9.0(芹菜素)、285.0/132.9(木犀草素)、463.2/300.1（异槲皮苷）、463.2/300.1（金丝桃苷）、431.2/311.1（牡荆素）、431.2/311.1（异牡荆素）、447.2/357.1（异荭草苷）、563.2/353.0(夏佛塔苷)、和563.2/353.0(异夏佛塔苷)。流动相为甲醇-0.1％乙酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0mL/min，色谱柱为DiamonsilC18column(150mm×4.6mm，5μm)，柱温40℃，进样量10μL。采用正交设计对提取条件进行优化，运用所建立的方法对16批金钱草及21批广金钱草进行了测定，并采用多重线图与聚类分析对不同来源的金钱草及广金钱草药材进行比较。
　　 结果:18种化学成分的峰面积和浓度在测定浓度范围内均具有良好的线性关系，相关系数均大于0.993，精密度、准确度、稳定性、检测限和定量限均符合要求，平均加样回收率为95.2-108.6％。样品测定结果表明，金钱草及广金钱草几乎含有相同的化学成分，但每个成分的含量不同;不同产地的金钱草化学成分差异较大，而广金钱草差异较小。
　　 结论:本法简便、快速、灵敏度高、专属性好，可用于金钱草及广金钱草中15种黄酮类和3种酚酸类成分的含量测定，为金钱草及广金钱草药材的质量控制提供了依据。
　　 第二部分液质联用法同时测定广金钱草中5种成分在大鼠血浆中的浓度及其药代动力学研究
　　 目的:建立LC-MS/MS方法同时测定大鼠血浆中夏佛塔苷、异牡荆素、木犀草素、芹菜素和阿魏酸的浓度，并用于大鼠灌胃给予广金钱草提取物后的药代动力学研究。
　　 方法:收集灌胃给予大鼠广金钱草提取物后的血浆样品，先加入适量盐酸酸化血浆，再用甲醇沉淀蛋白后进行样品分析，以磺胺甲噁唑(SMZ)作为内标，甲醇-0.1‰乙酸水溶液作为流动相梯度洗脱，流速0.8mL/min，色谱柱为DiamonsilC18column(150mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃。采用ESI源，MRM及负离子模式进行监测。进样量:20μL。
　　 结果:该方法精密度、准确度、检测限和定量限均符合要求，血浆中夏佛塔苷、异牡荆素、木犀草素、芹菜素和阿魏酸在测定浓度范围内均具有良好的线性范围。平均提取回收率为65.3-90.3％，基质效应为82.5-104.6％，均在允许范围内。药动学研究表明，黄酮苷（夏佛塔苷和异牡荆素）比黄酮苷元（木犀草素和芹菜素）吸收快但消除较慢，阿魏酸比黄酮苷和苷元更容易吸收并很快代谢。
　　 结论:该方法专属性好，简便快速，灵敏度高，可用于大鼠灌胃广金钱草提取物后血浆中5种成分的药代动力学研究。药动学研究结果可为进一步探讨广金钱草的药理作用机制及指导临床用药提供参考依据。
　　 第三部分液质联用法同时测定广金钱草中8种成分在大鼠胆汁中的浓度及其排泄动力学研究
　　 目的:建立LC-MS/MS法同时测定大鼠口服广金钱草提取物后胆汁中7种黄酮和1种酚酸类化合物的浓度，并用于胆汁排泄研究。8种化合物为柚皮素、异牡荆素、夏佛塔苷、异夏佛塔苷、芹菜素、异鼠李素、甘草素和阿魏酸。
　　 方法:大鼠灌胃给予广金钱草提取物后，分别在0-1，1-2，2-4，4-6，6-8，8-12，12-24h时间段收集胆汁。样品经乙酸乙酯液-液萃取。色谱柱为DiamonsilC18column（150mm×4.6mm，5μn），柱温40℃。以SMZ为内标，甲醇-0.1％乙酸水溶液作为流动相梯度洗脱，流速0.8mL/min。采用ESI源，MRM及负离子模式进行监测。
　　 结果:8种化合物的线性关系良好(r≥0.9915)，日内、日间精密度，稳定性良好。提取回收率均大于63.2％，基质效应为88.3％～110.3％。在0-24h内，胆汁样品中8种化合物累积排泄百分数分别为柚皮素（0.047±0.01）％，阿魏酸（1.145±0.46）％，异牡荆素（0.007±0.004）％，夏佛塔苷（0.998±0.24）％，异夏佛塔苷（0.015±0.01）％，芹菜素（0.043±0.018）％，异鼠李素（0.010±0.006）％，甘草素（0.147+0.075）％。不同个体之间差别较大。
　　 结论:该方法灵敏度高，选择性好，样品处理简单，可用于大鼠口服广金钱草提取物后胆汁中黄酮和酚酸类化合物的排泄动力学研究。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 基于液质联用技术的金钱草与广金钱草主要化学成分含量的比较研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 液质联用法同时测定广金钱草中5种成分在大鼠血浆中的浓度及其药代动力学研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 液质联用法同时测定广金钱草中8种成分在大鼠胆汁中的浓度及其排泄动力学研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 金钱草与广金钱草现代研究进展

致谢

个人简历