益肾通络方对膜性肾病大鼠的肾保护作用以及对肾组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA表达的影响

摘要

目的:本研究通过阳离子化牛血清白蛋白的方法建立膜性肾病大鼠模型，并应用益肾通络方对模型进行干预性治疗，通过观察大鼠的24小时尿蛋白定量、血清总蛋白、白蛋白、血脂、血肌酐、尿素氮等生化指标以及肾组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达，探讨益肾通络方对膜性肾病的治疗作用及其可能机制，从而为临床上治疗膜性肾病提供实验基础和理论依据。
　　 方法:选用清洁级健康雄性Wistar大鼠60只，普通饲料适应性喂养一周后留取大鼠尿液，测24小时尿蛋白定量均为正常。采用随机法将大鼠分为正常组15只，造模组45只。除正常组外，其余造模组大鼠预免疫一周后，隔日一次尾静脉注射C-BSA复制膜性肾病大鼠模型。连续注射4周后测24小时尿蛋白定量。确认造模成功后将造模组大鼠随机分为三组:模型组、盐酸贝那普利组及中药组。盐酸贝那普利组给予盐酸贝那普利10mg/kg/d灌胃，中药组予以益肾通络方3ml/d灌胃，正常组及模型组灌服相当量的生理盐水，各组共给药四周。给药结束后，禁食不禁水留取各组大鼠24小时尿液测定24小时尿蛋白定量，随后将大鼠处死，取血检测实验末血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)，留取肾组织，免疫荧光、光镜、电镜观察大鼠肾组织病理变化，Real-time PCR法检测Nephrin mRNA、Podocin mRNA在肾组织中的表达情况。
　　 结果:
　　 1、实验大鼠的一般状况
　　 正常组大鼠饮食及尿量正常，眼睛有神，反应敏捷，肌肉丰满。造模的大鼠尾静脉注射C-BSA后，均出现明显的纳食少、精神萎靡，毛发脱落，少动抱团，部分大鼠出现腹水及阴囊水肿。实验最后一周，与正常组相比，造模各组大鼠明显体型瘦小，毛发脱落，模型组的症状最为显著。造模期间除正常组外，造模组有三只大鼠死亡，死亡原因估计为注射C-BSA后的过敏反应以及严重感染，最终导致脏器衰竭。
　　 2、24小时尿蛋白定量的比较
　　 24小时尿蛋白定量，在连续尾静脉注射C-BSA4周后，造模组与正常组比较显著升高(P＜0.05）;给药4周后，盐酸贝那普利组及中药组与模型组相比明显降低(P＜0.05），而盐酸贝那普利组与中药组比较无明显差异(P＞0.05）。
　　 3、实验结束后各组大鼠血液生化指标的检测
　　 模型组、盐酸贝那普利组、中药组与正常组相比血清TP、ALB均明显降低而TC、TG均明显升高，有显著性差异（P＜0.05）;盐酸贝那普利组、中药组与模型组相比，血清TP、ALB均明显升高而TC、TG均明显降低，有显著性差异(P＜0.05）;中药组与盐酸贝那普利组相比差异性不明显，无统计学意义(P＞0.05）;各组大鼠血清BUN、Scr比较，无统计学意义(P＞0.05）;
　　 4、肾组织病理形态学观察
　　 免疫荧光观察显示:正常组大鼠无明显变化;模型组大鼠可见IgG、C3呈弥漫性的颗粒状沿肾小球毛细血管袢沉积;中药组与盐酸贝那普利组大鼠肾组织中IgG、C3呈颗粒状沿肾小球毛细血管袢呈现少量沉积。
　　 光镜下观察显示:正常组无明显异常改变，模型组可见肾小球毛细血管袢基底膜明显增厚，内皮细胞核显著增大，“钉突”较大;盐酸贝那普利组及中药组毛细血管袢基底膜增厚较模型组减轻，内皮细胞核轻微增大，可见少量“钉突”形成。
　　 电镜下观察显示:正常组大鼠肾组织足细胞结构清楚，足突排列整齐;模型组可见肾小球毛细血管基底膜增厚明显，肾小球上皮下有大量类似电子致密物沉积，足突相互融合，可见钉突形成;中药组与盐酸贝那普利组大鼠肾小球毛细血管基底膜轻度增厚，肾小球上皮下有少量的电子致密物沉积，部分足细胞足突开始出现融合。
　　 5、肾组织中Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达情况
　　 统计学分析结果显示，与正常组相比，模型组Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达明显降低，有显著性差异(P＜0.05)，与模型组相比，中药组与盐酸贝那普利组中Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达有所升高，统计学差异显著(P＜0.05），两治疗组之间比较无明显差异(P＞0.05）。
　　 结论:
　　 1、益肾通络方可以明显降低膜性肾病大鼠的尿蛋白、提高血清白蛋白、改善血脂代谢。
　　 2、益肾通络方能够抑制膜性肾病大鼠肾小球基底膜免疫复合物的沉积及基底膜的增厚，减轻肾脏病理损伤，延缓膜性肾病进一步发展。
　　 3、益肾通络方能够上调膜性肾病大鼠肾组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA的表达，其治疗膜性肾病的作用可能与保护足细胞，维持足细胞裂孔膜结构和肾小球滤过功能的完整有关。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 指标的留取与检测方法

4 统计学处理

结果

1 大鼠一般状况的观察

2 24小时尿蛋白定量的检测结果

3 血清TP、ALB的检测结果

4 血清TC、TG的检测结果

5 血清BUN、Scr的检测结果

6 肾组织病理形态学观察结果

7 大鼠肾组织Nephrin mRNA、Podocin mRNA表达情况的比较

附图

附表

讨论

1 实验动物模型的选择

2 阳性对照药物的选择

3 益肾通络方的立方依据以及组方分析

4 益肾通络方对膜性肾病大鼠的肾保护作用及其作用机理的探讨

结论

参考文献

综述 Nephrin、Podocin与肾脏疾病

致谢

个人简历