激活GABAB受体对糖尿病神经痛大鼠脊髓背角P-CREB和NR2B受体表达的影响

摘要

目的:糖尿病神经痛（diabeticneuropathicpain，DNP）属于神经病理性疼痛(neuropathicpain，NP)的一种类型，是糖尿病常见的并发症之一，在糖尿病患者中发病率很高且临床上治疗起来颇为棘手。阐明其发病机制对于更好的预防和治疗糖尿病神经痛具有十分重要的意义。目前已知中枢敏化在DNP的产生和维持中发挥着重要作用，而脊髓背角神经元中神经递质受体的表达变化又是中枢敏化形成和维持的重要原因，其中GABAB受体和NMDA-2B(NR2B)受体的作用尤为关键。
　　 转录增强因子cAMP反应原件结合蛋白(CREB)是细胞内多种信号转导通路的关键调节因子，其蛋白磷酸化水平调节着多种基因的转录、功能蛋白的合成，不仅参与NR2B表达变化和长时程增强效应(LTP)的形成，并且其磷酸化水平也与GABAB受体的功能状态密切相关。
　　 本实验通过腹腔注射本实验通过腹腔注射链尿佐菌素(STZ)，制备糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型，然后利用鞘内给予GABAB受体激动剂（巴氯芬）和拮抗剂(CGP55845)，探讨激活GABAB受体对糖尿病神经痛大鼠机械缩足阈值，脊髓背角磷酸化p-CREB和NMDA-2B(NR2B)受体表达的影响。
　　 方法:健康成年雄性SD大鼠62只，体重130g～150g，由河北医科大学实验动物中心提供，随机分为两组:正常对照组（C组）和糖尿病神经痛模型组（D组），腹腔分别注射生理盐水或链尿佐菌素(STZ，60mg/kg)。50只大鼠腹腔注射STZ，一周以后，有46只大鼠的空腹血糖＞16.7mol/L（成功率为92％），达到合格标准，血糖达标的大鼠于注射STZ两周后，用vonFreyHairs测定机械缩足阈值(PWT)，PWT小于4g为合格的神经病理性疼痛大鼠模型，共有36只大鼠成模（总成功率72％）。4周后36只DNP大鼠和12只同周龄正常大鼠鞘内置入PE-10导管，观察两天均未出现神经症状（成功率100％）。DNP大鼠根据鞘内给药（共20μl）随机分为三组(n=12):DNP对照组(D1组):生理盐水10μl+生理盐水10μl;巴氯芬组(D2组):生理盐水10μl+巴氯芬0.5μg;CGP55845+巴氯芬组(D3组):CGP5584510μg+巴氯芬0.5μg;12只正常大鼠作为正常对照组（C组），鞘内注射生理盐水10μl+生理盐水10μl。四组大鼠两次鞘内注射间隔15分钟，连续4天，每日鞘内注射前、后30分钟测定大鼠50％机械缩足阈值(PWT)，各时点分别为:T1、T2、T3、T4，最后1次测完后取大鼠脊髓背角，采用分子生物学方法测定p-CREB、CREB和NR2B受体表达变化。
　　 结果:与C组比较，D1、D3两组大鼠T1-T4各时点PWT明显降低(P＜0.05)，p-CREB和NR2B蛋白表达及NR2BmRNA表达明显增多(P＜0.05);与D1组比较，D2组大鼠各时点PWT显著升高(P＜0.05);与D1组p-CREB（0.76±0.13），NR2B（1.28±0.14）蛋白表达比较，D2组p-CREB(0.45±0.08)和NR2B（0.88±0.13）蛋白表达显著降低(P＜0.05)。与D1组NR2BmRNA表达（0.83±0.10）比较，D2组NR2BmRNA表达（0.53±0.08）显著降低(P＜0.05)。四组间相比较，CREB蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论:激活GABAB受体可使糖尿病神经痛大鼠脊髓背角p-CREB、NR2B蛋白表达下调，抑制糖尿病神经痛。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 主要试剂与设备

2 实验动物

3 实验分组

4 糖尿病模型制备

5 50％缩足反应阈值的测定(PWT)

6 鞘内置管方法

7 观察指标

8 实验方法

9 图像采集与分析

10 统计学处理

结果

1 一般观察

2 4组大鼠各时间点PWT的变化

3 RT-PCR实验

4 Western blot实验

附图

附表

讨论

1 糖尿病神经病理性疼痛模型的制备

2 激活GABAB受体对糖尿病神经痛的影响

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历