重度饮酒对大鼠脑内α-synuclein表达的影响

摘要

目前人类正常认知老化的界限还不明确，痴呆前的临床特征和痴呆综合症正在研究中。痴呆是一种综合症，其特点为记忆损害，以及其他认知功能下降到一定程度，导致患者的社会和职业功能明显受损。据估计，痴呆的发病率在65岁以上人群约为6％，其发病率随着年龄的增长呈指数增长，在95岁以上人群中，痴呆的发病率高达40-70％。在西方国家，最常见的痴呆是阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)和血管性痴呆(vasculardementia，VaD)，在所有痴呆中分别占70％和15％。长期重度饮酒与Wernicke-Korsakoff's综合症有关，也可能是产生临床痴呆（酒精性痴呆）的一个的决定因素，但其机理还不十分明确。
　　 α-突触核蛋白在脑内高表达，是路易体的主要组成部分，后者在多巴胺能神经元内沉积，是帕金森病(Parkinson's disease，PD)和其它神经变性疾病的特征。然而，其生理作用还不清楚。已提出的α-突触核蛋白的生理功能包括调节神经递质的释放和重摄取，参与突触前囊泡的循环以及分子伴侣作用。α-突触核蛋白在脑内多巴胺能神经元的表达水平很高，这表明此蛋白可能通过多种机制负向调节多巴胺能神经元的功能。研究表明，α-突触核蛋白可抑制与多巴胺合成有关的酶的效能，或降低其表达，影响多巴胺转运体的功能，抑制重复刺激时的多巴胺释放。重度饮酒对脑内α-突触核蛋白表达水平的影响还不是十分清楚。
　　 目的:观察分析重度饮酒（乙醇处理）大鼠脑内相关脑区α-突触核蛋白(α-synuclein)的表达变化，为酒精性痴呆的可能机制提供直接的形态学资料。
　　 方法:从河北医科大学实验动物中心选取36只3月龄、雄性Wistar大鼠，随机分作对照组和乙醇处理组，对照组大鼠正常饲养，乙醇处理组以20％酒精代替饮水。实验动物饲养3个月。
　　 1、免疫组织化学研究:大鼠深麻醉下经心灌注固定取脑及后固定，置于4℃蔗糖溶液过夜。把需要脑块行冠状位切片，进行免疫组织化学染色，贴片、封片。用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统分析所观察脑区α-synuclein光密度值。
　　 2、流式细胞学检测:大鼠断头取所需脑组织，搓洗、收集细胞悬液，离心。加入兔抗α-synuclein多克隆抗体室温孵育，洗涤，加入羊抗兔藻红素蛋白(PE-IgG)二抗工作液避光室温孵育，加入PBS10 ml离心，弃上清，铜网过滤后上机检测，电脑记录，计数α-synuclein的表达量X-mode值。
　　 3、免疫印迹检测:大鼠断头取脑组织，裂解、研磨，取上清，蛋白定量，分装，进行电泳、电转至PVDF膜，免疫显色，显影，定影。底片透扫，对Western条带进行定量分析，确定杂交条带的相对吸光度值。
　　 结果:
　　 1、免疫组织化学结果:免疫组织化学显示对照组大鼠黑质α-synuclein的光密度值0.417±0.021，乙醇处理组大鼠黑质α-synuclein的光密度值为0.581±0.014，乙醇处理组免疫反应强度明显增强(P＜0.05);免疫组织化学显示对照组大鼠尾壳核α-synuclein的光密度值为0.318±0.035，乙醇处理组大鼠尾壳核α-synuclein的光密度值为0.462±0.018，乙醇处理组免疫反应强度明显减弱(P＜0.05);
　　 2、流式细胞学检测结果:流式细胞学检测显示对照组大鼠黑质α-synuclein的X-mode值为532.21±8.33，乙醇处理组大鼠黑质α-synuclein的X-mode值为675.85±9.43，乙醇处乙醇处理组大鼠α-synuclein的表达量增加(P＜0.05);对照组大鼠尾壳核α-synuclein的X-mode值为593.84±14.16，乙醇处理组大鼠尾壳核α-synuclein的X-mode值为731.36±10.63，乙醇处乙醇处理组大鼠α-synuclein的表达量增加(P＜0.05)。
　　 3、免疫印迹检测结果:免疫印迹检测发现α-synuclein与β-actin条带相对吸光度比值的比值在黑质和尾壳核分别为:对照组0.0041±2.12×10-4和0.0032±3.62×10-4，乙醇处理组为0.0063±1.14×10-4和0.0058±1.57×10-4，与对照组相比，乙醇处理组大鼠黑质和尾壳核α-synuclein与β-actin条带相对吸光度比值明显升高（P＜0.05）。
　　 结论:重度饮酒引起大鼠脑内α-synuclein的表达明显增强，可能是导致酒精性痴呆的原因之一。

目录

声明

摘要

英文缩写

前言

材料与方法

1 材料

2 实验动物和方法

3 数据处理及统计学分析

结果

1 免疫组织化学结果

2 流式细胞学检测结果

3 免疫印迹检测结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 α-突触核蛋白在神经障碍中的病理作用

致谢

个人简历