CIK细胞治疗恶性肿瘤患者免疫功能变化分析研究

摘要

目的:分析60例恶性肿瘤患者细胞因子诱导杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells，CIK)治疗前后外周血淋巴细胞亚型的变化，通过比较CIK细胞治疗前后与健康志愿者外周血T淋巴细胞亚型及调节性T细胞(RegulatoryT cells，Treg)的变化，探讨CIK细胞治疗对恶性肿瘤患者免疫功能影响，为免疫细胞治疗恶性肿瘤提供理论依据。
　　 方法:
　　 1、采集60例恶性肿瘤患者及30例健康志愿者（正常对照组）外周血3ml，流式细胞术检测肿瘤患者及健康志愿者外周血T淋巴细胞亚型（CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值、CD4+CD25highT细胞、CD3-CD19+B淋巴细胞及CD3-CD56+自然杀伤细胞）的百分比，比较CIK治疗前与正常对照组淋巴细胞亚型的差异。
　　 2、采集60例恶性肿瘤患者外周血50ml，密度梯度离心法分离单个核细胞，加入CD3Ab、干扰素-γ（Interferon，IFN-γ）及重组人白介素-2（Interleukin，IL-2）等细胞因子在细胞净化室进行体外培养扩增12-14天，分3次回输患者体内，观察治疗前后患者免疫功能变化。
　　 3、采集恶性肿瘤患者CIK细胞治疗1次、3次后外周血3ml，流式细胞术检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚型百分比，比较CIK细胞治疗1次、3次与正常对照组T淋巴细胞亚型的差异。
　　 4、分析CIK细胞治疗前、CIK细胞治疗1次及治疗3次后调节性T细胞的变化，探讨CIK细胞治疗对调节性T细胞的影响。
　　 5、对CIK细胞治疗前后患者体力、睡眠和饮食情况进行临床观察，分析CIK细胞治疗对恶性肿瘤患者一般情况的影响。
　　 结果:
　　 1、流式细胞分析结果显示，恶性肿瘤患者CIK细胞治疗前免疫细胞表型与正常对照组比较，CD3+CD4+T细胞表达低于正常对照组且有统计学意义（31.24±3.58％ vs43.46±1.73％，P＜0.05），CD3+CD8+T细胞高于正常对照组且有统计学意义(38.21±4.59％ vs24.06±0.56％，P＜0.05)，CD4+/CD8+比值低于正常对照组且有统计学意义（0.92±0.21 vs1.81±0.08，P＜0.01），CD4+CD25highT细胞高于正常对照组且有统计学意义（3.2I±0.46％vs2.27±0.47％，P＜0.01），CD3-CD19+B淋巴细胞低于正常对照组但无统计学意义（8.65±1.91％ vs9.51±1.10％，P＞0.05），CD3-CD56+自然杀伤细胞(Natural killer cell，NK)低于正常对照组但无统计学意义(9.03±2.23％ vs13.21±1.92％，P＞0.05)。
　　 2、恶性肿瘤患者经CIK细胞治疗1次后较CIK细胞治疗前CD3+CD4+T细胞（37.05±3.16％ vs31.24±3.58％，P＜0.05）及CD4+/CD8+比值(1.35±0.23 vs0.92±0.21，P＜0.05)升高均有统计学意义，CD4+CD25high T细胞降低且有统计学意义(2.37±0.57％ vs3.21±0.46％，P＜0.01)，CIK细胞治疗前后CD3+CD8+T细胞降低但无统计学意义（34.21±4.49％ vs38.21±4.59％，P＞0.05），CIK细胞治疗后较治疗前CD3-CD56+NK细胞升高（9.85±1.75％ vs9.04±2.23％，P＞0.05）及CD3-CD19+B细胞降低（7.27±1.38％ vs8.65±1.91％，P＞0.05）但无统计学意义。
　　 3、CIK细胞治疗1次后免疫细胞表型与正常对照组比较，CD3+CD4+T细胞低于正常对照组但无统计学意义(37.05±3.16％ vs43.46±1.73％，P＞0.05)，CD3+CD8+T细胞高于正常对照组且有统计学意义(34.21±4.49％ vs24.06±0.56％，P＜0.05)，CD4+/CD8+比值低于正常对照组但无统计学意义（1.35±0.23 vs1.81±0.08，P＞0.05），CD4+CD25highT细胞高于正常对照组但无统计学意义（2.58±0.55％ vs2.27±0.47％，P＞0.05），CD3-CD19+B淋巴细胞低于正常对照组但无统计学意义（7.37±1.38％ vs9.51±1.10％，P＞0.05），CD3-CD56+NK细胞低于正常对照组但无统计学意义(9.85±1.75％ vs13.21±1.92％，P＞0.05)。
　　 CIK细胞治疗3次后免疫细胞表型与正常对照组比较，CD3+CD4+T细胞低于正常对照组（40.46±4.48％ vs43.46±1.73％，P＞0.05）、CD3+CD8+T细胞高于正常对照组（35.10±5.12％ vs24.06±0.56％，P＞0.05）、CD4+/CD8+比值低于正常对照组(1.44±0.32 vs1.81±0.08，P＞0.05)、CD4+CD25highT细胞低于正常对照组(1.99±0.50％ vs2.27±0.47％，P＞0.05)、CD3-CD19+B淋巴细胞低于正常对照组(6.97±1.18％ vs9.51±1.10％，P＞0.05)及CD3-CD56+NK细胞低于正常对照组（8.33±1.91％ vs13.21±1.92％，P＞0.05）但均无统计学意义。
　　 4、恶性肿瘤患者CD4+CD25highT细胞在CIK细胞治疗前后（3.21±0.46％ vs2.58±0.55％，P＜0.01）、CIK细胞治疗前与CIK细胞治疗3次(3.21±0.46％ vs1.99±0.50％，P＜0.01)及CIK细胞治疗1次与CIK细胞治疗3次（2.58±0.55％ vs1.99±0.50％，P＜0.01）均有统计学意义。
　　 5、CIK细胞治疗前后恶性肿瘤患者一般情况临床观察。
　　 CIK细胞治疗前，恶性肿瘤患者乏力发生率为93.33％，CIK细胞治疗后为23.33％; CIK细胞治疗前睡眠差为80.00％，CIK细胞治疗后为43.33％; CIK细胞治疗前饮食欠佳为75.00％，CIK细胞治疗后为38.33％;CIK细胞治疗后患者体力、睡眠和饮食等一般情况较CIK细胞治疗前显著改善。仅有2例患者在回输CIK细胞时一过性发热(最高体温不超过38.5℃)，给予对症处理后体温恢复正常。
　　 结论:
　　 1、恶性肿瘤患者免疫识别和杀伤功能低下，CIK细胞治疗可通过提高CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞表达，达到杀伤恶性肿瘤细胞的目的。
　　 2、恶性肿瘤患者CD4+CD25highT细胞表达升高，存在免疫逃逸，CIK细胞治疗后能降低恶性肿瘤患者CD4+CD25highT细胞表达以减弱或消除免疫抑制，防止免疫逃逸，进一步增强恶性肿瘤患者免疫识别和杀伤功能，过继性细胞免疫治疗可作为恶性肿瘤治疗方法之一。
　　 3、多次CIK细胞治疗增强免疫杀伤、抑制免疫逃逸的效果优于单次治疗。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述一 免疫细胞治疗研究进展

综述二 紫杉醇与肿瘤免疫研究进展

致谢

个人简历