舒洛地特对膜性肾病大鼠肾脏中podocin、CD2AP、nephrin表达的影响

摘要

目的:膜性肾病(membranons nephropathy，MN)是成人性肾病综合征的常见病因，其病理特点为局限于肾小球上皮下免疫复合物沉积。临床表现为大量蛋白尿。本研究通过注射阳离子化牛血清白蛋白的方法，建立SD大鼠膜性肾病模型，并应用舒洛地特进行干预，观察大鼠24小时尿蛋白定量以及膜性肾病肾小球podocin、CD2AP、nephrin表达的变化，从而探讨舒洛地特对膜性肾病干预的新靶点，为人类防治膜性肾病提供新的理论依据。
　　方法:选择8周龄清洁级健康雄性SD大鼠40只，体重160±20g，普通饲料适应性饲养1周后，测24小时尿蛋白均为正常，采用随机法将其分为4组，正常对照组、模型组、高剂量舒洛地特组、低剂量舒洛地特组，每组10只。除正常对照组外，其余组应用自备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)预免疫1周后，隔日尾静脉注射C-BSA复制膜性肾病大鼠模型。正常对照组尾静脉注射等体积生理盐水，连续4周后代谢笼中留取各组大鼠24小时尿液，检测24小时尿蛋白定量。造模成功后高剂量舒洛地特组给予舒洛地特20mg/kg灌胃，低剂量舒洛地特组给予舒洛地特10mg/kg灌胃。模型组和正常对照组灌服等体积生理盐水，各组大鼠自由进食、饮水。连续给药4周后，再次留取各组大鼠的24小时尿液，检测24小时尿蛋白定量，随后将大鼠处死，留取肾组织，应用光镜、电镜观察大鼠肾小球病变情况，采用免疫组织化学方法检测podocin、CD2AP、nephrin的表达情况，结果应用图像分析系统IPP(Image-Pro Plus)进行半定量分析。
　　结果:
　　1.实验大鼠的一般情况
　　正常对照组的大鼠饮食、尿量均正常，反应灵敏，眼睛有神，肌肉丰满。其余三组大鼠经尾静脉注射C-BSA后，出现饮食减少、精神萎靡、毛发脱落、少动抱团，大部分大鼠出现阴囊水肿。实验最后一周时，与正常对照组相比，造模各组大鼠体形较小，毛发脱落（腹部为重）。
　　2.24小时尿蛋白定量
　　24小时尿蛋白定量，在连续尾静脉注射C-BSA4周后，模型组、高剂量舒洛地特组、低剂量舒洛地特组与正常对照组比较均显著升高(P均＜0.05)，连续舒洛地特灌胃4周后，高剂量舒洛地特组与低剂量舒洛地特组24小时尿蛋白较前均有所降低，与模型组相比有显著性差异(P均＜0.05)，与低剂量舒洛地特组相比，高剂量舒洛地特组24小时尿蛋白降低更明显(P＜0.05)。
　　3.肾组织病理形态学观察
　　光镜:正常对照组大鼠肾小球形态基本正常，毛细血管袢开放良好，无固有细胞增多，无基底膜增厚;模型组大鼠肾小球固有细胞增多，基底膜明显增厚;高剂量舒洛地特组和低剂量舒洛地特组大鼠的肾小球固有细胞轻度增多，基底膜增厚较模型组减轻。
　　电镜:正常对照组大鼠的足细胞结构清晰，足突排列整齐;模型组大鼠的肾小球基底膜弥漫增厚，上皮下电子致密物沉积，足细胞足突广泛融合或消失;低剂量舒洛地特组大鼠肾小球基底膜不规则增厚，上皮下电子致密物沉积，足突部分融合;高剂量舒洛地特组大鼠基底膜轻度增厚，上皮下少量电子致密物沉积，足突部分融合。
　　4.免疫组化结果
　　从免疫组化染色中可以观察到podocin、CD2AP、nephrin三种蛋白表达于肾小球上皮下。该三种蛋白在正常对照组肾小球上均有大量表达，模型组、低剂量舒洛地特组及高剂量舒洛地特组肾小球上也均有表达，但较正常对照组表达降低，有统计学意义（P均＜0.05)，模型组中podocin、CD2AP、nephrin的表达较低剂量舒洛地特组及高剂量舒洛地特组表达均降低，有统计学意义（P均＜0.05)，低剂量舒洛地特组与高剂量舒洛地特组相比，podocin、CD2AP、nephrin表达较低，具有统计学意义（P均＜0.05）。
　　结论:
　　1.膜性肾病大鼠足细胞nephrin、podocin及CD2AP表达下降，并与足细胞足突融合程度及蛋白尿程度变化一致。提示nephrin、podocin及CD2AP可能参与膜性肾病肾小球足细胞损伤和蛋白尿产生。
　　2.舒洛地特可以降低膜性肾病大鼠24小时尿蛋白含量。
　　3.舒洛地特可以上调膜性肾病大鼠肾组织中podocin、CD2AP、nephrin的表达，提示舒洛地特对膜性肾病的肾脏保护作用可能与维持足细胞裂隙隔膜结构和肾小球滤过功能的完整性有关。
　　4.舒洛地特治疗大鼠膜性肾病尿蛋白及肾脏保护作用具有剂量依懒性。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3．0 统计学分析

结果

1 实验动物的一般情况观察

2 各组大鼠24小时尿蛋白定量的检测结果

3 各组大鼠肾组织病理形态学观察

4 免疫组化观察肾组织中podocin、CD2AP、nephrin的表达情况

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 CD2AP相关作用的研究进展

致谢

个人简历