沉默信息调节因子1在大鼠酒精性脂肪肝发病机理中的作用

摘要

目的:酒精性脂肪性肝病(alcoholic fatty liver disease，AFLD)是长期大量饮酒所致的肝脏早期病变，可进一步发展为酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化甚至肝硬化。在动物模型中发现:慢性酒精摄入可以影响机体内脂质代谢的重要调节因子脂联素(adiponectin，Adip)-沉默信息调节因子1(silentinformation regulator1，SIRTI)-腺苷酸活化蛋白激酶(adenosinemonophosphate activated protein kinase，AMPK)轴的功能。脂联素是由脂肪细胞对各种代谢信号应答时特异性分泌的一种胶原样血浆蛋白，具有两种脂联素受体(adiponectin recpetor, AdipoR)分别为AdipoR1和AdipoR2。而这两个受体正是脂联素传递信号的信使从而增加脂肪酸氧化并减少脏器的脂肪沉积。在部分动物模型实验中，慢性酒精摄入可以明显减少脂联素以及肝脏脂联素受体的mRNA表达。SIRT1也是肝脏脂质代谢过程中的重要调节因子，用脂联素刺激H4IIEC3细胞能够明显增加SIRT1的蛋白表达。而SIRT1表达上调的同时还伴随着磷酸化的AMPK的表达升高。本研究旨在探讨脂联素(Adip)-沉默信息调节因子1(SIRT1)-腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路在大鼠酒精性肝病发病机理中的作用。
　　方法:雄性Wistar大鼠50只，随机分为模型组和对照组，模型组采用酒精灌胃法建立大鼠酒精性肝病(ALD)模型，分别于4、8、12和16周末随机分批处死，检测其血清Adip和TNF-α;应用苏木素-伊红、天狼红及苏丹Ⅳ染色观察肝组织病理变化;分别应用RT-PCR和Western bloting法检测SIRT1、AMPK、脂联素受体(Adip R)、固醇调节原件结合蛋白（SREBP）和乙酰辅酶A羧化酶(ACC) mRNA和蛋白表达水平;同时免疫组织化学法检测肝组织SIRT1、AMPK、SREBP及其ACC表达。多组间均数比较采用单因素方差分析，相关性分析采用Pearson相关分析。
　　结果:随着造模时间延长，大鼠血清TNF-α水平逐渐升高，而Adip水平逐渐降低，二者呈负相关(r=-0.91 p＜0.01);16周末大鼠出现肝细胞弥漫小泡性脂肪变性，窦周纤维化，汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成;模型16周组肝组织中SIRT1、AMPK和Adip R2 mRNA相对表达量分别为(0.21±0.05)、(0.50±0.09)和（0.19±0.06），显著低于0周组的（1.12±0.18）、（0.84±0.14）和（0.69±0.19），（均p＜0.01），而ACC（1.13±0.08）及SREBP（1.03±0.06）表达明显高于0周组（0.62±0.15）和（0.53±0.09）（均p＜0.01）;蛋白质表达趋势与mRNA变化趋势相一致。
　　结论:酒精抑制Adip-SIRT1-AMPK信号通路导致下游脂代谢调节因子异常表达，使得肝细胞脂质代谢紊乱而发生脂质沉积，这可能为酒精性脂肪性肝病发生的重要机制之一。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 血清脂联素和TNF-α指标的变化

2 肝组织病理

3 免疫组织化学染色

4 肝组织SIRT1、AMPK、SREBP、ACC、AdipR1和AdipR2的mRNA表达量

5 Western blot法检测大鼠肝组织中SIRT1、AMPK、P-AMPK、AdipR1和AdipR2蛋白表达

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 沉默信息调节因子1在酒精性脂肪性肝病发病机理中的作用

致谢

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