金莲花黄酮类化合物的提取工艺及体外抗氧化活性研究

摘要

金莲花(Trollius chinensis Bunge)又称旱金莲，是毛茛科(Ranunculace-ae)金莲花属(Trollius spp.)的植物，属于多年生草本植物，其主要成分为黄酮类和生物碱类，目前的研究结果表明，金莲花具有抗菌、消炎、抗病毒、抗癌等作用。本文对金莲花中总黄酮的提取工艺、黄酮类分离纯化及体外抗氧化活性进行了系统的研究。
　　目的:研究金莲花中黄酮类化合物的提取、分离纯化及体外抗氧化活性。
　　方法:对金莲花植物总黄酮的提取工艺进行了研究，设计L9(34)正交试验，以醇提物和水提物中出膏率和总黄酮含量为指标，确定乙醇提取的最佳工艺。本实验中金莲花总黄酮提取物经大孔树脂初步分离后，乙酸乙酯萃取，再采用制备高效液相色谱法进行单体分离。鉴定并测定其含量，对金莲花中总黄酮的抗氧化活性进行了初步研究。
　　结果:水提取金莲花的出膏率平均为44.938％，RSD为3.01％，总黄酮平均含量为7.714％，RSD为2.56％。乙醇提取金莲花的出膏率平均为43.694％，RSD为2.49％，总黄酮平均含量为14.142％，RSD为1.26％。水提取工艺和乙醇提取工艺的出膏率相近，但是从提取物总黄酮含量来说，乙醇提取工艺提取的黄酮总含量明显高于水提取工艺提取的黄酮总含量。金莲花总黄酮含量的提取工艺采用乙醇提取工艺较佳。乙醇提取法选取了乙醇浓度、提取时间、提取次数和乙醇用量倍数四个影响因素，采用了正交实验方法优化了提取工艺，进一步表明乙醇提取工艺具有操作简便、稳定性好、成产成本较低等优点，为金莲花的进一步开发提供了参考依据。
　　AB-8大孔树脂采用总黄酮提取液上样量30 mL，收集70％乙醇洗脱液经乙酸乙酯萃取后制备型高效液相色谱进样量6mL，馏分收集得荭草苷、牡荆苷馏份，经减压浓缩至一定体积，真空冷冻干燥，即得荭草苷、牡荆苷单体，NMR波谱学方法鉴定荭草苷、牡荆苷实验光谱数据与标准品一致。测定其含量达到98％以上。
　　本实验用维生素C作为阳性对照，研究结果表明金莲花黄酮对DPPH自由基IC50:总黄酮IC50=6.30 mg·L-1，维生素C IC50=2.41 mg·L-1。金莲花溶液的浓度不断增加，吸光度值不断减少，而清除率在不断的增加，说明金莲花总黄酮对自由基的清除率随着剂量的不断增加而增大。金莲花黄酮对超氧阴离子自由基的抑制IC50:总黄酮IC50=36.8 mg·L-1，维生素C IC50=3.50 mg·L-1。金莲花溶液的浓度不断增加，吸光度值不断减少，而清除率在不断的增加，说明金莲花总黄酮对自由基的清除率随着剂量的不断增加而增大。金莲花黄酮对羟基自由基作用的抑制IC50:总黄酮IC50=69.42 mg·L-1，维生素C IC50=5.90 mg·L-1。金莲花溶液的浓度不断增加，吸光度值不断增加，而清除率在不断的增加，说明金莲花总黄酮对自由基的清除率随着剂量的不断增加而增大。
　　结论:本课题确定了金莲花中总黄酮提取的最佳工艺应采用醇提法，对金莲花进行了荭草苷和牡荆苷的单体纯化及制备，该法灵敏度高，操作简便，所得荭草苷和牡荆苷单体含量达到98％以上。为该植物黄酮类成分化合物的后续研究奠定了坚实的科研基础。金莲花对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基均具有清除作用，金莲花中总黄酮具有体外抗氧化作用。为金莲花进一步研究提供了参考依据。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 金莲花黄酮类化合物提取工艺实验结果

2 金莲花黄酮类化合物的分离纯化实验结果

3 金莲花黄酮类化合物的体外抗氧化活性实验结果

附图

附表

讨论

1 金莲花黄酮类化合物提取工艺

2 金莲花黄酮类化合物的分离纯化

3 金莲花黄酮类化合物的体外抗氧化活性

结论

1 金莲花黄酮类化合物提取工艺

2 金莲花黄酮类化合物的分离纯化

3 金莲花黄酮类化合物的体外抗氧化活性

参考文献

综述 金莲花属植物的研究进展

致谢

个人简历