α-硫辛酸对硫酸吲哚酚致脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响

摘要

目的:慢性肾脏疾病(chronic kidney disease，CKD)患者尤其是终末期肾衰患者的心血管发病率和死亡率远高于普通人群。加速性动脉粥样硬化是尿毒症患者心血管并发症的主要病理机制之一，起始于血管内皮细胞损伤。CKD患者随着肾小球滤过率降低，肾毒性物质在体内蓄积，可诱导氧化应激反应，促进动脉血管产生粥样硬化病变。硫酸吲哚酚(indoxylsulfate，IS)即是其中一种代表性的蛋白结合毒素，诱发氧化应激使心血管系统受损并加速慢性肾脏病进程。α-硫辛酸(α-lipoic acid，LA)是天然存在的最强抗氧化剂，目前在糖尿病、糖尿病并发症、缺血再灌注损伤等疾病的防治方面应用较广泛，而在CKD患者应用较少。本研究以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)为对象，探讨α-硫辛酸能否对硫酸吲哚酚致血管内皮细胞产生的氧化损伤起到保护作用及其可能的作用机制，为α-硫辛酸在慢性肾脏病中应用提供实验依据。
　　方法:培养人脐静脉内皮细胞，将其分成对照组（CONTROL组），α-硫辛酸组（LA组），硫酸吲哚酚组（IS组）和硫酸吲哚酚+α-硫辛酸组(IS+LA组)。用MTS法检测细胞存活率;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)的含量;用流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(reactiveoxygen species，ROS)的变化;应用RT-PCR法测定NADPH氧化酶4(NOX4) mRNA的表达。
　　统计学处理采用GraphPad Prism5软件，实验数据中计量资料用均数±标准差表示。多组间均数比较采用单因素方差分析（ANOVA），均数两两比较采用Bonferroni法检验，P＜0.05具有统计学意义。各组实验至少重复3次。
　　结果:
　　1、IS呈浓度（100、200、500μm/L）依赖性的降低细胞存活率，大于等于200μm/L时与对照组相比具有统计学意义(P＜0.001);而LA呈浓度(20、50、100、250、500μm/L)依赖性的提高细胞存活率，大于等于250μm/L时与对照组有显著性差异(P＜0.01);250μm/L LA预处理细胞再与500μm/L IS共培养，与IS组（500μm/L）相比，细胞存活率显著提高(P＜0.01)。选定500μm/L和250μm/L分别作为IS和LA继续实验浓度。
　　2、与对照组（1.29±0.40nmol/ml）相比，IS组（2.87±0.66nmol/ml）细胞MDA含量升高(P＜0.001);细胞经LA预处理，IS+LA组（2.04±0.46nmol/ml）较IS组（2.87±0.66nmol/ml）MDA含量降低(P＜0.05)。
　　3、与对照组(62.07±1.60％)相比，IS组(76.17±2.26％)ROS阳性细胞率增加(P＜0.001）;细胞经LA预处理，IS+LA组(69.70±3.01％)较IS组(76.17±2.26％)ROS阳性细胞率降低(P＜0.05)。
　　4、与对照组（1.00±0.24）相比，IS组（1.65±0.18）细胞NOX4 mRNA相对表达量升高(P＜0.05);细胞经LA预处理，IS+LA组（1.11±0.41）较IS组（1.65±0.18）NOX4 mRNA相对表达量降低（P＜0.05）。
　　结论:
　　1、硫酸吲哚酚诱导氧化应激使内皮细胞受损
　　2、α-硫辛酸可能通过下调NADPH氧化酶，降低ROS水平，改善硫酸吲哚酚对内皮细胞的氧化损伤

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验试剂

2 主要的仪器设备和材料

3 主要溶液的配制

4 实验方法和步骤

5 统计学方法

结果

1 MTS检测内皮细胞存活率

2 细胞培养上清液MDA的检测

3 内皮细胞活性氧检测

4 NADPH氧化酶4(NOX4)的表达

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 NADPH氧化酶与硫酸吲哚酚

致谢

个人简历