Oct4与Wnt/β-catenin信号通路在结直肠癌中的表达及与患者预后的关系

摘要

目的:结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是常见的恶性肿瘤之一，目前全球每年新增病例近60万例。因此，如何早期发现早期诊断及采取有效治疗方案降低结直肠癌的发病率和死亡率，已成为目前研究的热点之一。肿瘤分子生物学的改变在许多临床肿瘤中被证实是一个判断转移，预测预后的指标。研究结直肠癌的早期诊断方法，探索与结直肠癌转移、复发及预后相关的针对性指标对结直肠癌的辅助诊断与远期治疗具有非常重要的意义。
　　大量的研究表明，肿瘤中存在肿瘤干细胞，其是肿瘤生长、侵袭、转移和复发的根源。八聚体结合转录因子4(Octamer binding transcriptionfactor4，OCT4)是全能性或多能性干细胞标记物，作为胚胎干细胞的特异性基因，其在多种生殖细胞肿瘤有表达，但是，OCT4在体细胞肿瘤中是否有表达仍有较大争议。Wnt/β-Catenin信号转导通路是由一系列癌基因和抑癌基因编码的蛋白质组成，在胚胎发育、细胞转运及细胞凋亡等过程中发挥了显著的调节作用。此外，现有研究亦表明，该信号转导通路的异常活化或表达与许多恶性肿瘤的发生、发展具有相关性，但相关机制仍需要深入研究去探讨、分析。
　　本课题分别选取干细胞标记物OCT4和Wnt信号通路中Wnt1a、β-Catenin等生物标记物作为研究指标，采用免疫组织化学(Immunohistochemistry，IHC)技术检测以上三标记物在结直肠癌、结直肠腺瘤以及正常结直肠粘膜中蛋白水平的表达情况，分析它们与结直肠癌的发生、发展及与患者临床病理特征和预后的相互关系，从而深入探讨OCT4及Wnt通路在结直肠癌发病机制中的作用及相互关系，为结直肠癌的早期诊断、预后判断及远期治疗等提供新的依据。
　　方法:以原发性结直肠癌术后病例95例，结直肠腺瘤组织23例、结直肠黏膜组织12例正常结直肠黏膜组织作为研究对象，采用免疫组织化学技术（SP两步法）检测以上三组Oct4、Wnt1a、β-Catenin的表达情况，同时对所选结直肠癌患者进行随访研究，分析三标记物在结直肠癌发生、发展和转移中的意义，探讨它们的相互作用关系及各标记物的表达与患者预后的相关性。
　　结果:(1)对95例结直肠癌患者进行回顾性研究，并进行随访，分析患者的临床病理特征与预后的关系，结果显示，结直肠癌肿瘤的组织学分级、患者的TNM分期、淋巴结转移及远处转移等情况均为影响其预后的因素。而患者的发病年龄、性别、肿瘤的大体类型、病理类型及直径等均与患者的无瘤生存期不具有相关性。(2)结直肠癌组织中OCT4的阳性表达率为58.9％(56/95)，明显高于腺瘤和正常结直肠黏膜组织(阳性率分别为34.8％(8/23)和16.7％(2/12)(x2=10.478，P=0.005); OCT4的阳性表达与肿瘤的组织学分级、患者的TNM分期以及淋巴结转移情况相关(P均＜0.05);Oct4的表达情况可影响患者的肿瘤死亡(P=0.010)，阳性表达的患者预后差。(3)免疫组化染色结果显示，结直肠癌组织中Wnt1a的阳性表达率为42.1％(40/95)，明显高于结直肠腺瘤组织17.4％(4/23)及正常结直肠黏膜组织8.3％(1/12)(x2=9.032，P=0.011);其阳性表达与患者的TNM分期、淋巴结转移及远处转移情况相关（P均＜0.05）;此外，Wnt1a的表达情况可影响患者的肿瘤死亡(P=0.002)，阳性表达的患者生存时间短。(4)β-Catenin在正常胃结直肠黏膜组织中主要为膜表达，在结直肠腺瘤中出现少量异常表达，即膜表达缺失或异位表达（胞浆或胞核表达），在结直肠癌中异常表达率较高;结直肠癌组织中β-Catenin蛋白的异位表达率为70.5％(67/95)，明显高于腺瘤和正常结直肠黏膜组织(阳性率分别为30.4％(7/23)和8.3％(1/12)，(x2=25.390，P=0.000);β-Catenin蛋白的异位表达与患者的TNM分期以及淋巴结转移情况相关(P均＜0.05);β-Catenin蛋白的异位表达情况可影响患者的肿瘤死亡(P=0.002)，其异位表达的患者生存时间短。(5)OCT4与Wnt1a在结直肠癌的表达呈正相关(r=0.278，P=0.006);在结直肠癌OCT4的表达与β-Catenin的异位表达呈正相关(r=0.305，P=0.003);在结直肠癌Wnt1a的表达与β-Catenin的异位表达呈正相关(r=0.411，P=0.000)。
　　结论:
　　1、OCT4及Wnt1a在结直肠癌组织中表达明显上调，β-Catenin蛋白的在结直肠癌组织中的异位表达率也明显增高，表明OCT4及Wnt/β-Catenin信号通路可能在结直肠癌的发生、发展过程中起重要的调控作用。
　　2、OCT4及Wnt1 a的表达与β-Catenin蛋白的异位表达均与结直肠癌患者的TNM分期及淋巴结转移情况相关，表明上述标记物的表达或者异位表达可能对结直肠癌的进展起重要作用，可作为结直肠癌的临床辅助诊断指标。
　　3、OCT4及Wnt1a的表达与β-Catenin蛋白的异位表达均与结直肠癌患者生存相关，其表达情况可影响患者的肿瘤死亡，阳性表达或异位表达的患者生存时间短。
　　4、在结直肠癌OCT4及Wnt1a的表达与β-Catenin的异位表达呈正相关，表明OCT4及Wnt/β-Catenin信号通路在结直肠发生、发展过程中可能起到相互协调相互促进的作用。
　　5、检测结直肠癌组织中β-Catenin蛋白的异位表达和OCT4、Wnt1a的阳性表达情况，可能对正确评估、分析并探讨结直肠癌的发生、发展相关机制以及预后的判断具有重要的指导意义。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 病例选择

2 免疫组织化学染色

1 主要试剂

2 主要仪器

3 染色过程

4 结果判断

5 统计学方法

结果

第一部分 95例结直肠癌患者的临床病理资料

第二部分 免疫组化染色结果

附图

附表

讨论

1 Oct4在结直肠癌中的表达及意义

2 Wnt1a及β-Catenin在结直肠癌中的表达及意义

3 Wntla及β-Catenin与Oct4在结直肠癌中表达的机制探讨

结论

参考文献

综述 Wnt／β-Catenin信号转导通路与结直肠癌的相关性研究进展

致谢

个人简历