肝微粒体酶CYP2C9、CYP2D6和CYP3A对艾瑞昔布在大鼠体内代谢的影响

摘要

目的:建立LC-MS/MS测定大鼠血浆中艾瑞昔布浓度的方法，并对艾瑞昔布在大鼠体内的代谢进行研究探索，完善其药代动力学研究。
　　方法:
　　色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流动相为乙腈∶水∶甲酸(85∶15∶0.1，V/V/V)，流速为1.0 mL·min-1，柱温为30℃，进样量为10μL，内标:甲苯磺丁脲。
　　质谱条件:离子化方式:电喷雾离子化源(electrospray ionization，ESI);检测方式:正离子检测;扫描方式:多反应监测(multiple reactionmonitoring，MRM);离子源喷射电压5500 V;离子源温度:550℃;气帘气压力:40 psi;雾化气(GS1，N2)压力:40 psi;辅助气(GS2，N2)压力:40 psi;碰撞气压力:6 psi;艾瑞昔布的解簇电压(declusteringpotential，DP)和碰撞电压(collision energy，CE)值分别为100 V和45eV，甲苯磺丁脲的DP和CE值分别为22 V和32 eV;用于定量分析的离子反应质荷比(mass-charge ratio，m/z)分别为370.1→236.2（艾瑞昔布）和271.2→155.0（甲苯磺丁脲）。
　　动物实验方法:健康雄性SD大鼠80只，随机分为四组。四组大鼠分别灌胃给予蒸馏水、胺碘酮（40 mg·kg-1）、帕罗西汀(2 mg·kg-1)和酮康唑(20 mg·kg-1)。连续给药7天，1次/d。四组大鼠均于第8天灌胃给予艾瑞昔布(20 mg·kg-1)并分别于给药前(0 min)和给药后10 min、20min、30 min、45 min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24 h于眼底静脉丛取血0.5 mL，6500×g离心10 min后取血浆200μL，冷冻保存。
　　血浆处理方法:取血浆200μL，加内标溶液20μL，涡旋混匀10s，加提取剂乙酸乙酯1mL，涡旋混匀1 min，4500×g离心8 min，取上清液于1.5 mL离心管中，40℃水浴氮气吹干，400μL流动相复溶，10μL进样测定。
　　药动学参数处理方法:采用DAS2.0软件对每只大鼠的系列血药浓度进行统计矩自动拟合并得到药动学参数，采用SPSS13.0软件对实验组与对照组的主要药动学参数进行统计学分析。若比较的两组参数均服从正态分布，则选用两个独立样本的t检验进行分析，若其中一组不服从正态分布，则选用非参数检验进行分析。P值小于0.05认为两组间差异有统计学意义。
　　结果:艾瑞昔布的保留时间为2.27 min，甲苯磺丁脲的保留时间为2.26min，血浆内源性杂质对其浓度的测定无干扰;标准曲线为Y=0.016 X+0.072(r=0.9997);艾瑞昔布低(20 ng·mL-1)、中(80 ng·mL-1)、高(320ng·mL-1)三个浓度的方法回收率依次为102.2％，98.71％和97.01％，提取回收率分别为61.65％，65.33％和72.57％，甲苯磺丁脲的提取回收率为51.64％;艾瑞昔布低、中、高三个浓度的日内RSD分别为8.8％，2.8％和1.9％，日间RSD分别为7.4％，2.0％和1.9％;艾瑞昔布血浆样品于-40℃低温保存30天及反复冻融三次后性质稳定，且处理后的血浆样品于4℃放置12h对测定无影响。
　　对照组大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1125.1±457.6mg·h·L-1, AUC0-∞:1331.3±592.6 mg·h·L-1, t1/2:7.4±3.8 h,Tmax:1.5±0.6h,CL:0.02±0.01 L·h-1·kg-1,V:0.17±0.07 L·kg-1和 Cmax:162.2±53.0mg·L-1。合用胺碘酮后，大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1814.8±693.4 mg·h·L-1, AUC0-∞:2091.6±887.1 mg·h·L-1, t1/2:7.8±4.5h,Tmax:1.7±0.6 h，CL:0.01±0.01 L·h-1·kg-1，V:0.11±0.05 L·kg-1和Cmax:268.2±115.7 mg·L-1。合用帕罗西汀后，大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1485.5±480.3 mg·h·L-1，AUC0-∞:1730.4±606.5 mg·h·L-1，t1/2:7.3±5.2 h，Tmax:1.5±0.7h，CL:0.01±0.01 L·h-1·kg-1，V:0.12±0.06 L·kg-1和Cmax:192.1±70.6 mg·L-1。合用酮康唑后，大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数如下:AUC0-t:1191.9±626.7 mg·h·L-1，AUC(0-∞):1391.0±692.0 mg·h·L-1，t1/2:8.0±4.2 h，Tmax:1.5±0.7 h，CL:0.02±0.01L·h-1·kg-1，V:0.19±0.11 L·kg-1和Cmax:159.0±70.5 mg·L-1。与对照组相比，合用胺碘酮后药动学参数AUC0-t，AUC0-∞，Cmax均明显增大，CL，V明显减小，且差异具有统计学意义;合用帕罗西汀后，AUC0-t，AUC0-∞，Cmax显著增大，CL显著减小，差异有统计学意义;合用酮康唑后，所有组间的差异均没有统计学意义。
　　结论:本文所建立的LC-MS/MS测定艾瑞昔布浓度的方法，简便、准确、灵敏度高、重现性好，适用于大鼠体内血浆中艾瑞昔布浓度的测定。
　　合用胺碘酮后，大鼠体内艾瑞昔布的暴露率增大，清除减慢，说明艾瑞昔布的代谢减慢，CYP2C9受到抑制后影响了艾瑞昔布在大鼠体内的代谢，进一步表明CYP2C9参与了艾瑞昔布在大鼠体内的代谢;合用帕罗西汀后，大鼠体内艾瑞昔布的AUC明显增大，CL明显减小，表明合用帕罗西汀后艾瑞昔布的代谢因CYP2D6的活性受到抑制而减慢，CYP2D6参与大鼠体内艾瑞昔布的代谢;合用酮康唑前后，大鼠体内艾瑞昔布的药动学参数均无显著变化，提示CYP3A可能没有参与艾瑞昔布在大鼠体内的代谢。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 LC-MS／MS法测定大鼠血浆中艾瑞昔布的浓度

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 CYP 2C9、CYP 2D6和CYP 3A抑制剂对艾瑞昔布在大鼠体内代谢的影响

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

结论

综述

致谢

个人简历