泄浊解毒、活血通络中药对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用及对肾组织PKC和TGF-β1的影响

摘要

目的:本研究应用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)复制糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠模型，给予泄浊解毒、活血通络中药及厄贝沙坦对该模型进行干预，通过观察大鼠的尿蛋白、生化指标、肾脏病理形态学变化及肾组织蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)的表达水平，来探讨泄浊解毒、活血通络中药的肾保护作用及可能机制。
　　方法:健康雄性SD大鼠85只，体重160-180g，适应性饲养一周，测定血糖和尿蛋白均为阴性后，随机选取15只为正常组(NG)，其余70只为造模组。正常组予以普通饲料喂养，造模组予以高糖高脂饲料喂养，12周后造模组给予腹腔注射STZ35mg/kg，正常组大鼠予以腹腔注射相应剂量的枸橼酸缓冲液。72小时后尾静脉测随机血糖≥16.7mmol/L为模型复制成功，死亡和血糖不达标的大鼠予以剔除。模型复制成功的大鼠随机分为模型组(MG)17只、中药组(ZG)17只、西药组(XG)17只、加方组（中药联合西药组）(JG)16只。治疗组予相应药物溶液灌胃，正常组与模型组予相当量的生理盐水，共给药16周。分别于给药期间第4周、8周、12周末测体重、血糖及尿蛋白。于给药第16周末，留取大鼠24小时尿液，测定24小时尿蛋白定量，动物麻醉状态下腹主动脉取血检测生化指标，摘取右侧肾脏并称重，留取肾脏标本进行光镜、电镜、免疫组化和Real-Time PCR观测。
　　结果:
　　1、各组大鼠的体重、右肾重及肾脏肥大指数KI(kidney hypertrophy index)（KI=右肾重/体重）
　　与正常组相比，各治疗组和模型组体重显著减轻(P＜0.05)，模型组与各治疗组相比体重无明显差异(P＞0.05);各组大鼠的右肾重无显著差异(P＞0.05);各组大鼠的肾脏肥大指数比较，模型组和各治疗组明显高于正常组(P＜0.05)，模型组与各治疗组相比没有明显差异（P＞0.05）。
　　2、各组大鼠的24 h尿蛋白定量(UTP)
　　各治疗组和模型组的24 h尿蛋白定量比正常组明显升高(P＜0.05)，各治疗组比模型组明显降低(P＜0.05);各治疗组之间比较，加方组的24h尿蛋白定量比中药组和西药组降低（P＜0.05）;中药组和西药组相比无明显差异（P＞0.05）。
　　3、各组大鼠的血清总蛋白(TP)，白蛋白(ALB)比较
　　各治疗组和模型组血清总蛋白和白蛋白比正常组均降低(P＜0.05)，各治疗组的血清总蛋白和白蛋白比模型组明显升高(P＜0.05);各治疗组之间比较，加方组血清总蛋白和白蛋白比中药组和西药组升高(P＜0.05);中药组和西药组相比无明显差异（P＞0.05）。
　　4、各组大鼠血清总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)的比较
　　各治疗组和模型组的TC，TG比正常组显著升高(P＜0.05)，各治疗组的TC，TG比模型组明显降低(P＜0.05);各治疗组之间比较，加方组的TC，TG低于中药组和西药组(P＜0.05);中药组和西药组相比无明显差异（P＞0.05）。
　　5、各组大鼠血肌酐(Scr)，尿素氮(BUN)的比较
　　正常组、模型组、西药组、中药组及加方组之间大鼠的血清肌酐和尿素氮水平无明显差异（P＞0.05）。
　　6、各组大鼠糖化血红蛋白(HbA1c)的比较
　　各治疗组和模型组的的糖化血红蛋白水平比正常组明显升高(P＜0.05)，加方组和中药组的糖化血红蛋白水平低于西药组和模型组(P＜0.05)，加方组和中药组相比无明显差异(P＞0.05)，模型组和西药组之间无明显差异（P＞0.05）。
　　7、肾脏病理形态学观察
　　7.1光镜观察
　　正常组大鼠肾小球结构完整清晰，未见明显肥大，肾小球毛细血管基底膜无增厚，系膜组织无增生，基质无明显改变。模型组大鼠肾小球肥大，基底膜明显增厚，系膜基质增多。与正常组相比，各治疗组大鼠肾小球均有程度不同的病理改变，程度较模型组轻。各治疗组之间相比无明显差别。
　　7.2电镜观察
　　正常组大鼠的肾小球毛细血管基底膜均匀无增厚，结构清晰，足突分布均匀、无融合;模型组大鼠的肾小球毛细血管基底膜增厚，内皮细胞明显增生，伴有足突广泛融合。各治疗组出现程度不同的病理改变，较模型组为轻。各治疗组之间相比无明显差别。
　　8、大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达情况的比较
　　与正常组相比，各治疗组和模型组TGF-β1mRNA的表达明显增加(P＜0.05);与模型组相比，各治疗组TGF-β1mRNA的表达均明显降低(P＜0.05);各治疗组之间比较，加方组TGF-β1mRNA的表达低于中药组和西药组(P＜0.05)，中药组和西药组相比无明显差异（P＞0.05）。
　　9、免疫组化染色法检测肾组织PKC、TGF-β1表达
　　PKC、TGF-β1在正常组、模型组和各治疗组中均有表达，两者表达部位均主要位于肾小管上皮细胞，而在肾小球内只有少量表达或基本无表达。与正常组相比，各治疗组和模型组PKC、TGF-β1的表达明显增加(P＜0.05);与模型组相比，各治疗组PKC、TGF-β1的表达均明显降低(P＜0.05);治疗各组间比较，加方组PKC、TGF-β1的表达低于中药组和西药组(P＜0.05)，中药组和西药组相比无明显差异(P＞0.05)。
　　结论:
　　1、泄浊解毒、活血通络中药可以降低大鼠尿蛋白排泄及血糖、血脂水平，提高血清总蛋白、白蛋白水平，减轻肾脏病理改变，延缓DN病理的进展。
　　2、泄浊解毒、活血通络中药可以有效抑制DN基底膜增厚及系膜基质增生，从而保护肾脏，其机制可能与抑制肾组织PKC、TGF-β1过度表达有关。
　　3、泄浊解毒、活血通络中药与厄贝沙坦疗效相当，联合应用效果更佳。

目录

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摘要

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 TGF-β1与糖尿病肾病的关系及中医药研究进展

致谢

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