五味子乙素预防BaP致HTR-8/SV neo细胞氧化损伤及DNA损伤的研究

摘要

目的:探讨五味子乙素对BaP致HTR-8/SVneo细胞氧化损伤及DNA损伤的预防作用，并初步研究其可能的作用机制。
　　方法:
　　1、建立体外BaP损伤模型及测定不同浓度五味子乙素的保护作用:实验分组:对照组、BaP染毒组、BaP染毒+不同剂量的五味子乙素(0.1、0.5、2μmol/L)组。用MTS法测定细胞存活率。
　　2、氧化系统物质的分析:测定相关氧化物质，活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量变化及一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS/NO)系统中一氧化氮(NO)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、总一氧化氮合酶(TNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的含量变化。
　　3、抗氧化系统物质的分析:测定抗氧化相关酶，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量变化。
　　4、DNA氧化损伤程度的评价:通过彗星实验（单细胞凝胶电泳）测定细胞DNA损伤程度;利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞外液中DNA氧化损伤标记物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。
　　5、DNA氧化损伤修复的评价:半定量PCR(RT-PCR)及实时定量PCR(qRT-PCR)技术分别检测碱基切除修复途径相关基因人X射线修复交差互补组1(XRCC1)、人多聚ADP核糖聚合酶（PARP1）、人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)基因的表达水平，ELISA法检测XRCC1、PARP1蛋白表达量和免疫印迹法(westernblotting)检测人8-羟基鸟嘌呤DNA糖菅酶OGG1蛋白表达量。
　　结果:
　　1、五味子乙素对BaP致HTR-8/SVneo细胞损伤的保护作用
　　经MTS法检测。根据染毒强度和细胞存活率状况，选定染毒浓度为20μmol/l BaP作用24小时，建立BaP损伤模型，同时选定五味子乙素浓度为0.1、0.5、2μmol/l。研究发现:与BaP组相比，不同剂量五味子乙素组能显著降低BaP对HTR-8/SVneo细胞的杀伤作用，提高细胞的存活率，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　2、五味子乙素对BaP损伤模型中氧化物质的影响
　　与对照组比较，BaP组细胞ROS、LDH、MDA的表达量显著增加，细胞NOS/NO系统中TNOS、iNOS、eNOS活性增强，NO表达量增加(P＜0.05)。而不同剂量的五味子乙素组与BaP组相比，细胞ROS、LDH、MDA含量均有不同程度的减少，细胞NOS/NO系统中TNOS、iNOS、eNOS活性降低，NO含量减少(P＜0.05)。
　　3、五味子乙素对BaP损伤模型中抗氧化系统的影响
　　与对照组比较，BaP组细胞SOD、GSH-Px的活性下降(P＜0.05)，而不同剂量的五味子乙素组与BaP组相比，细胞SOD、GSH-Px的活性显著提高(P＜0.05)。
　　4、五味子已素对BaP损伤模型中DNA损伤的影响
　　与对照组比较，BaP组细胞培养液中8-OHdG的表达量显著升高，同时彗星实验表明细胞DNA损伤程度显著增加，其O Live尾距、尾长及尾部DNA％含量增加，头部DNA％含量减少(P＜0.05)。而五味子乙素提前干预后，明显抵抗了因BaP诱导的8-OHdG含量的升高，同时DNA损伤程度也明显减轻，其O Live尾距、尾长、尾部DNA％显著低于BaP组，而头部DNA％高于BaP组(P＜0.05)。
　　5、五味子乙素对BaP损伤模型中DNA损伤修复的影响
　　与对照组比较，BaP组碱基切除修复途径相关因子XRCC1、PARP1、OGG1基因及蛋白的表达量显著降低(P＜0.05)。而不同剂量的五味子乙素组与BaP组相比，XRCC1、PARP1、OGG1基因及蛋白的表达量显著提高(P＜0.05)。
　　结论:
　　1、BaP可引起细胞氧化—抗氧化系统失衡，诱发细胞的氧化应激，导致脂质过氧化水平升高以及抗氧化能力减弱。而五味子乙素可通过提高氧化酶SOD、GSH-Px的活性，减少自由基的生成量，降低NOS酶的活性，减少NO的含量，维持NOS/NO系统的平稳，纠正细胞氧化系统和抗氧化系统的失衡状态，从而预防BaP对细胞的氧化损伤。
　　2、BaP可诱发细胞产生氧化应激反应造成DNA的氧化损伤。而五味子乙素可以通过作用于碱基切除修复途径，上调相关修复基因OGG1、XRCC1、PARP1的表达水平，提高DNA氧化损伤的修复能力，减少DNA的氧化损伤。
　　因此，五味子乙素有望开发为一个高效的天然药物以实现优生、保护胚胎健康发育，为人类生殖健康提供一个天然的防护伞。

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综述 空气污染与妊娠期并发症

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