厚朴酚对戊四氮慢性致痫大鼠海马神经元的保护作用

摘要

目的:
　　癫痫为神经内科一组常见的综合征，各个年龄阶段均可发生，该病症可反复发作，如不及时治疗会威及生命。现已有多种抗癫痫药物相继问世，但这些药物大部分以控制症状为主，且治疗疗程长、副作用相对较多，部分患者遵医嘱服用药物后仍不能控制症状。常有患者因治疗过程中停药或未经医师指导换药而功亏一篑，其难治性给患者及家属带来生活和心理上的极大压力。
　　癫痫是由脑部异常放电所产生的脑部功能紊乱引起的。有研究证据表明，癫痫的多次发作后可对中枢神经系统产生不可逆的损伤，尤以海马等边缘系统神经元的损伤为甚。癫痫发作可使中枢神经系统出现形式多样的病理改变，包括神经元丢失、凋亡、胶质纤维增生、苔藓纤维增多等，其中细胞凋亡是神经元损伤的主要形式。癫痫对于脑部的损伤是严重的，但目前尚无有效的脑保护药物。厚朴酚是一种传统中药，有研究显示其单体具有中枢镇静、抑制炎症反应、抗衰老等多种药理学作用。这种单体有否保护癫痫脑损伤的作用是一个值得研究的课题。
　　本研究拟以戊四氮(PTZ)慢性致痫的SD大鼠作为对象，用厚朴酚单体成分进行干预，通过行为学、免疫组织化学和Western bolt等技术方法，检测其在改善行为、保护神经元的作用，为研制新型抗癫痫损伤药物提供基础研究资料。
　　方法:
　　SPF级成年雄性SD大鼠75只，实验起始体重200±20g，随机均分为溶媒对照组(NS)、单纯戊四氮致痫组(PTZ)、高剂量厚朴酚+PTZ组(H)、中剂量厚朴酚+PTZ组(M)和低剂量厚朴酚+PTZ组(L)，用腹腔注射PTZ方法复制癫痫动物模型。以PTZ点燃癫痫发生率评价其为行变化，通过尼氏染色观察海马神经元形态和数量的变化，用Western bolt、免疫组化检测海马凋亡因子Caspase-3的表达、免疫酶联法检测TNF-α的表达以检测对细胞的保护作用。
　　结果:
　　1、行为学观察结果
　　对第7天，14天，21天，28天，35天和42天的点燃率的统计中，PTZ组大鼠点燃率均显著大于各药物控制组及NS组，并随着厚朴酚干预剂量的增加PTZ点燃率有下降趋势。
　　2、免疫酶联法检测各组大鼠海马区的TNF-α表达结果
　　各组大鼠海马组织中PTZ组(284.45±20.70)的TNF-α表达量显著性地高于其他组(P＜0.05); NS组（144.01±28.85）则低于其他各组;在药物干预组中，高剂量组（186.43±21.34）、中剂量组（189.44±22.12）、低剂量组（192.14±39.01）间无显著性差异（P＞0.1）。
　　3、Western bolt检测各组大鼠海马区Caspase-3蛋白表达水平
　　PTZ组大鼠海马组织Caspase-3蛋白水平（3.01±0.56）显著地高于其他各组(P＜0.05);药物干预组中，低剂量组（2.50±0.46）显著高于其他两组(P＜0.05);中剂量组（1.98±0.40）高于高剂量组（1.44±0.32）(P＜0.05);NS组表达量最少（P＜0.05）。
　　4、免疫组化检测各组大鼠海马区Caspase-3阳性神经元的结果
　　PTZ组的Caspase-3阳性细胞数，在CA1区（76.57±5.79）和CA3区（71.05±5.11）均显著高于各药物干预组（P＜0.05）;NS组的CA1区（31.12±5.01）、CA3区（17.55±3.56）均显著低于其余各组的阳性细胞数;3个药物干预组的海马CA1区的Caspase-3阳性细胞数则随剂量的增加而显著减少(P＜0.05)，既低剂量组（57.33±7.26）＞中剂量组（47.81±5.99）＞高剂量组（39.57±4.16）;而在海马CA3区，低剂量组（47.98±4.33）显著多于高剂量组（33.63±1.13）和中剂量组（33.78±4.39）(P＜0.05)，但高、中两组间无显著性差异(P＞0.05)。
　　5、尼氏染色检测海马区神经元形态和数量的结果
　　PTZ组海马区CA1和CA3区的神经元显示出细胞固缩、核分离和溶解等细胞凋亡的特征，且细胞数量明显减少、排列散乱。药物控制组亦可见少量神经元肿胀，胞核染色深浅不均等现象，但神经元数量较比PTZ组明显增多、损伤小、细胞排列较规整。NS组海马CA1及CA3区海马结构相对完整，椎体细胞排列规整，胞浆呈均匀染色清晰的紫蓝色，未见明显丢失。
　　上述5项检测结果显示，较比模型动物，厚朴酚干预后大鼠的癫痫点燃率、海马区凋亡因子(Caspase-3、TNF-α)的表达水平均显著降低、细胞的存活数量显著升高，细胞形态也明显好于PTZ组，有明显的剂量依赖关系。
　　结论:
　　1、厚朴酚能显著地抑制PTZ的致痫作用，其效果有剂量依赖性;
　　2、厚朴酚能对癫痫脑损伤有明显的保护作用，有显著的量效关系;
　　3、厚朴酚对海马神经元的保护作用与降低TNF-α的释放和Caspase-3的表达有关，可能是通过降低TNF-α-Caspase-3-凋亡信号通路的作用实现其保护功能的。

目录

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材料与方法

结果

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附表

讨论

结论

参考文献

综述 厚朴酚药理作用的研究进展

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