硫化氢改善肾血管性高血压大鼠子代对血管紧张素Ⅱ的反应性

摘要

目的：通过围产期或出生后外源性给予硫氢化钠（NaHS）,观察能否改善肾血管性高血压（RVH)大鼠子代的血压，临界高血压患病率以及对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的反应性。
　　方法：⑴模型制备：常规制备两肾-夹肾血管性高血压动物模型。⑵实验分为四组：正常 SD大鼠子代组（FSD），肾血管性高血压大鼠子代组（F1NF2N），肾血管性高血压大鼠亲代硫化氢（hydrogen sulfide, H2S）治疗组（F1HF2N），肾血管性高血压大鼠子代H2S治疗组（F1NF2H），其中，F1HF2N组亲代雌鼠围产期（怀孕开始至哺乳期结束）每天腹腔注射56 umol/Kg NaHS（H2S供体）；F1NF2H组孕鼠围产期不做处理，生产后子鼠5周开始，每天腹腔注射56 umol/Kg NaHS。⑶所有子代大鼠从产后8周开始，采用鼠尾动脉测压系统测量清醒状态下大鼠的尾动脉收缩压（systolic blood pressure, SBP）,每2周测一次血压，至16周。⑷侧脑室置管，应用脑立体定位仪，按照Paxinos&Watson大鼠脑立体定位图谱，右侧脑室植入套管，通过聚乙烯管连接微量注射泵向侧脑室注射AngⅡ。⑸连接Powerlab生物信号采集系统,实时记录大鼠右侧股动脉平均血压（mean blood pressure, MAP），心率（heart rate, HR）和左侧肾神经传出放电（renal sympathetic nerve activity, RSNA)的变化。⑹通过Western blot技术检测孤束核（nucleus tractus solitarii, NTS）血管紧张素II受体1（angiotensin II type1 receptor, AT1R）、血管紧张素受体偶联蛋白（angiotensin receptor associated protein, ATRAP)及氧化应激相关蛋白Nox2, p67phox,Nitrotyrosine(NT)的表达。
　　结果：①F1NF2N组雄性子代大鼠8～16周收缩压（SBP），临界高血压患病率均大于正常雄性子代FSD组，具有统计学差异。围产期或出生后外源性给予NaHS后，F1HF2N组和F1NF2H组雄性子代大鼠的收缩压及临界高血压患病率较F1NF2N组明显下降，具有统计学差异。②F1NF2N组雌性子代大鼠8～16周收缩压均高于正常雌性子代FSD组，有统计学差异。围产期外源性给予NaHS后，F1HF2N组雌性子代大鼠8周时血压明显低于F1NF2N组；出生后外源性给予NaHS后，F1NF2H组雌性子代大鼠16周时血压较F1NF2N组明显下降，有统计学意义。各组雌性子代大鼠8～16周临界高血压患病率均无明显差异。③雄性子代大鼠侧脑室微量注射 AngⅡ10ng后，BP，HR和 RSNA均增加，且 F1NF2N组雄性子代大鼠 MAP，RSNA升高幅度显著大于 FSD组(ΔMAP：10.83±0.48 vs.8.17±0.70 mmHg；ΔRSNA：25.90±2.53％vs.16.78±1.70％，P＜0.05）。与F1NF2N组相比，F1HF2N组和F1NF2H组雄性子代大鼠对 AngⅡ的反应性明显下降（ F1HF2N组ΔMAP：8.33±0.61 mmHg；ΔRSNA：16.42±1.98％；F1NF2H组ΔMAP：8.17±0.60 mmHg；ΔRSNA：16.68±2.41％，P＜0.05）。侧脑室微量注射 AngⅡ30ng时，各组雄性子代大鼠对 AngⅡ的反应性趋势同 AngⅡ10ng，而且 BP，HR和RSNA升高幅度更加明显。各组雄性子代大鼠的心率变化无明显差异。④雌性子代大鼠侧脑室微量注射 AngⅡ10ng后，BP，HR和 RSNA均增加，但各组之间无统计学差异。侧脑室微量注射 AngⅡ30ng后，各组雌性子代BP，HR，RSNA升高幅度明显增加，且F1NF2N组雌性子代大鼠对AngⅡ的反应性显著大于FSD组(ΔMAP：10.83±0.60 vs.8.08±0.45 mmHg；ΔRSNA：26.88±2.61％ vs.19.59±1.50％，P＜0.05）。与F1NF2N组相比，F1HF2N组和 F1NF2H组雌性子代大鼠对 AngⅡ的反应性明显下降（F1HF2N组ΔMAP：7.67±0.84 mmHg；ΔRSNA：19.78±1.50％；F1NF2H组ΔMAP：7.50±0.67 mmHg；ΔRSNA：18.82±2.25％，P＜0.05）。各组雌性子代大鼠的心率变化无明显差异。⑤Western blot结果显示,与FSD组相比，F1NF2N组雄性子代大鼠NTS区AT1R，Nox2，p67phox，NT蛋白表达明显增多，ATRAP蛋白表达明显降低，有统计学差异。F1HF2N组和F1NF2H组雄性子代大鼠NTS区AT1R， Nox2，p67phox，NT表达较F1NF2N组明显下降，ATRAP表达较F1NF2N组明显升高，具有统计学差异。⑥Western blot结果显示,与FSD组相比，F1NF2N组雌性子代大鼠NTS区AT1R蛋白表达明显增加，有统计学意义，而ATRAP，Nox2，p67phox， NT蛋白表达与FSD组相比无统计学差异。F1HF2N组和F1NF2H组雌性子代大鼠NTS区AT1R蛋白表达较F1NF2N组明显下降，且具有统计学差异。
　　结论：⑴硫化氢可以改善肾血管性高血压大鼠子代的血压，临界高血压患病率，以及对AngⅡ的反应性。其改善作用可能是通过抑制AngⅡ-ATlR通路及下调氧化应激相关蛋白的表达来实现的。⑵肾血管性高血压大鼠对雌雄子代的影响存在性别差异，推测雌激素可能通过抑制氧化应激，发挥了一定的保护作用。

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前言

材料与方法

1 主要实验仪器与试剂

2 动物

3 2KlC模型的制备

4 实验分组

5 侧脑室埋管

6 血压，心率，肾神经放电记录

7 Western Blot 法检测蛋白表达

8 数据分析及统计

结果

1 各组雄性子代大鼠血压(SBP)变化

2 各组雌性子代大鼠血压(SBP)变化

3 各组雄性子代大鼠临界高血压患病率的变化

4 各组雌性子代大鼠临界高血压患病率的变化

5 各组雄性子代大鼠对AngⅡ的反应性

6 各组雌性子代大鼠对AngⅡ的反应性

7 各组雄性子代大鼠AT1R，ATRAP及氧化应激相关蛋白的变化

8 各组雌性子代大鼠AT1R，ATRAP及氧化应激相关蛋白的变化

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:硫化氢在中枢神经系统的研究进展

致谢

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