丹参多酚酸对应激大鼠抑郁样行为的改善作用及相对端粒长度变化的研究

摘要

目的：观察丹酚酸对慢性温和应激所致的大鼠抑郁样行为的影响及应激后外周血和右侧海马相对端粒长度变化。
　　方法：将92只健康雄性，体质量在110-150g的清洁级Sprague Dawley大鼠按照随机数字法分为5组，即非应激+生理盐水组（对照组）1个，19只；应激+生理盐水组干预，19只；其他研究组分别为应激+氟西汀干预（氟西汀组），18只；应激+丹参多酚酸干预（丹酚酸组），20只；应激+氟西汀+丹酚酸干预（联合组），16只。除对照组外，其余4组进行慢性温和应激造模。每日采用2种应激方法，同种应激不能连续出现，平均每种刺激被采用3次，使动物不能预料应激的发生，对照组不接受任何实验应激源，连续应激21天，建立抑郁模型。造模成功后，应激各组每日不定时继续给予以上应激，且每天下午各组分别腹腔注射相对应的丹参多酚酸40 mg/kg，氟西汀20 mg/kg，生理盐水，丹酚酸40 mg/kg+氟西汀20 mg/kg，体积体质量比10 ml/kg，每周固定时间进行蔗糖偏爱实验，记录大鼠蔗糖和水消耗量，统计蔗糖偏好率（G,％），糖水偏好率=蔗糖水消耗量/（蔗糖水消耗量+纯水消耗量）×100%。称体质量，统计其体质量增长率（K,%），即应激3周后体质量增长率=（应激后体质量-应激前1周体质量）/应激后体质量×100%；给药3周后体质量增长率=（给药后体质量-应激3周后体质量）/给药后体质量×100%。给药3周后进行强迫游泳测试，Morris水迷宫测试（Morris Water Maze, MWM）。本实验数据采用SPSS19.0进行统计学处理，大鼠体质量（g）、蔗糖偏好率（G,%）、强迫游泳后4分钟静止不动时间（T4，单位:s）、水迷宫前5天的平均逃避潜伏期（s）及第6天的穿越平台象限（s）、大鼠的全血相对端粒长度数据以均数±标准差（x?s）表示，大鼠右侧海马相对端粒长度采用中位数（四分位数间距），Median（Interquartile range），即M（IQR）表示，检验水准为0.05。对5组的大鼠的基线水平的体质量（g）、应激3周后与给药3周后体质量增长率（K,%）、蔗糖偏好率、强迫游泳后4分钟静止不动时间（ T4,单位: s）、大鼠的全血相对端粒长度进行单因素方差分析和Bonferroni法两两比较，水迷宫前5天大鼠的平均逃避潜伏期进行重复测量分析。水迷宫第6天大鼠穿越平台象限时间（单位: s）采用进行单因素方差分析和Bonferroni法两两比较。对应激3周后和给药3周后水迷宫第6天各组大鼠穿越平台象限时间进行配对t检验。大鼠右侧海马相对端粒长度采用Kruskal Walli检验，Nemenyi检验用于右侧海马相对端粒长度组间两两比较。
　　结果：
　　1、基线水平时：5组的体质量和蔗糖偏好率差异没有统计学意义（F=1.412, P=0.237;F=2.175, P=0.078）。
　　2、慢性温和应激建立抑郁大鼠模型，应激3周后，5组大鼠的体质量增长率差异有统计学意义（F=10.775, P＜0.001），对照组、氟西汀组、丹酚酸组、联合组与生理盐水组相比较，K有差异，且差异有统计学意义（均P＜0.001）；应激3周后，5组的蔗糖偏好率分别为：生理盐水组：（43.95±12.38）%，氟西汀组：（48.56±12.25）%，丹酚酸组：（48.00±10.33）%，联合组：（45.31±10.17）%，对照组：（67.37±13.02）%。5组比较蔗糖偏好率的差异有统计学意义（F=12.453，P＜0.001），对照组的蔗糖偏好率高于其他组（均P＜0.001）；应激3周后各组大鼠T4分别为，生理盐水组：（32.55±10.54）s，氟西汀组：（31.93±13.99）s，丹酚酸组：（34.72±10.66）s，联合组：（35.02±12.75）s，对照组：（18.68±5.28） s，5组比较 T4有差异，且差异有统计学意义（F=4.777，P=0.002），应激各组T4高于对照组（均P＜0.05）；应激3周后大鼠水迷宫测试前5天数据重复测量分析显示各处理组间平均逃避潜伏期差异有统计学意义（F=5.732, P＜0.001），测量时间之间差异有统计学意义（F=136.000, P＜0.001），处理组和测量时间对大鼠的水迷宫结果差异无统计学意义（F=1.964, P=0.061）。多变量方差分析显示：应激第1天，各组间比较差异无统计学意义（F=0.272, P＞0.05），应激第2-5天，各组大鼠平均逃避潜伏期差异有统计学意义（F分别为15.148,6.632,2.009,2.743,均P＜0.05）。其中应激第2天，经Bonferroni两两比较得到，应激4组平均逃避潜伏期均值高于对照组（均P＜0.05）。应激4组之间分别比较，其平均逃避潜伏期差异无统计学意义（均P＞0.05）。应激3周后5组大鼠的水迷宫第6天穿越平台象限时间进行单因素方差分析显示，各组间差异有统计学意义（F=19.233, P＜0.001）。经Bonferroni两两比较得到，应激4组大鼠的穿越平台象限时间低于对照组（均P＜0.001）。应激4组大鼠两两比较穿越平台象限时间差异无统计学意义（均P＞0.05）。
　　3、给药3周后：5组大鼠的体质量增长率（K）有差异，其中生理盐水组：（11.17±4.65）%，氟西汀组：（22.34±6.70）%，丹酚酸组:（19.11±4.76）%，联合组：（21.58±7.25）%，对照组：（19.67±6.67）%，且差异有统计学意义（F=10.084, P＜0.001），氟西汀组与丹酚酸、联合组分别比较，体质量增长率差异无统计学意义（均P＞0.05），氟西汀组K高于生理盐水组，K差异有统计学意义（P＜0.001）；丹酚酸与联合组、对照组分别比较差异无统计学意义（均P＞0.05），丹酚酸组体质量增长率高于生理盐水组，其差异具有统计学意义（P＜0.05）；联合组与丹酚酸组比较，体质量增长率差异无统计学意义（P＞0.05），联合组与生理盐水组比较，体质量增长率差异具有统计学意义（P＜0.001）；给药3周后，蔗糖偏好测试：5组的蔗糖偏好率（G）有统计学差异（F=18.809, P＜0.001）。氟西汀组、丹酚酸组、联合组与对照组的G差异无统计学意义（P均＞0.05）。生理盐水组的大鼠G低于其他4组（均P＜0.001）。给药3周后强迫游泳测试：给药3周后，5组大鼠的T4差异有统计学意义（F=6.137, P＜0.001），氟西汀组、丹酚酸组、联合组的 T4分别与对照组比较差异无统计学意义（均P＞0.05），生理盐水组的T4高于对照组（P＜0.001）。氟西汀组与丹酚酸组、联合组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）；给药3周后Morris水迷宫测试（MWM）显示，前5天5组大鼠平均逃避潜伏期差异有统计学意义（F=16.243, P＜0.001），测量时间之间差异有统计学意义（F=9.359, P＜0.001）。多变量方差分析显示：给药第1-5天，各组大鼠平均逃避潜伏期差异有统计学意义（F分别为6.762,7.248,3.923,8.145,4.678；均P＜0.01），其中给药第1天，经过Bonferroni两两比较得到，对照组与丹酚酸组、氟西汀组、联合组之间平均逃避潜伏期差异无统计学意义（均P＞0.05），而对照组与生理盐水组平均逃避潜伏期差异有统计学意义（P＜0.05）。生理盐水组平均逃避潜伏期时间高于其他4组（均P＜0.001）。5组的水迷宫测试第6天大鼠穿越平台象限时间差异有统计学意义（F=14.499, P＜0.001）。经过Bonferroni两两比较得到，对照组与氟西汀组、丹酚酸组、联合组大鼠的穿越平台象限时间差异无统计学意义（均P＞0.05）。生理盐水组穿越平台象限时间低于其他各组（均P＜0.05），联合组穿越平台象限时间高于丹酚酸组，且差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　给药3周后，各组间全血相对端粒长度差异有统计学意义（F=18.910, P＜0.001）。经Bonferroni两两比较，氟西汀组、丹酚酸组、联合组、对照组的全血相对端粒长度均值高于于生理盐水组（均 P＜0.001）。采用Kruskal Wallis检验对大鼠右侧海马相对端粒长度进行分析（χ2=12.004, P＜0.05）。用Nemenyi检验进行两两比较，对照组、氟西汀组、丹酚酸组的右侧海马相对端粒长度均值高于生理盐水组（均P＜0.05）。
　　结论：
　　1、大鼠经历3周的慢性温和应激能出现抑郁相关行为。
　　2、慢性温和应激所致的抑郁生理盐水组大鼠全血和海马端粒长度缩短。
　　3、丹参多酚酸和氟西汀药物均能改善大鼠抑郁相关行为。
　　4、丹参多酚酸能改善大鼠认知功能，联合抗抑郁药氟西汀治疗效果可能优于单独使用丹参多酚酸药物。
　　5、丹酚酸、氟西汀药物可能会影响端粒长度。

目录

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中文摘要

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英文缩写

前言

材料与方法

1研究对象

2 方法

3 统计学处理

结果

1大鼠体质量变化

2行为学试验

3 大鼠的全血和海马DNA扩增和熔解曲线图

4大鼠的全血相对端粒长度检测结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述: 与精神障碍相关的端粒、端粒酶研究进展

致谢

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