肢体缺血预处理脑保护作用及上调p38 MAPK和ERK的神经-体液机制

摘要

目的:本课题的研究目的在于:探讨股神经、坐骨神经、自由基、腺苷在LIP脑保护作用及上调海马CA1区p38 MAPK和ERK表达中的协同作用，以观察神经-体液通路在LIP脑保护中的作用，从而进一步明确肢体缺血预处理发挥脑保护作用及上调p38 MAPK和ERK的机制，为提高神经元缺血耐受性提供更充实有力的依据，为预防与治疗缺血性脑血管病开辟更广阔的天地。
　　方法:选用健康雄性Wistar大鼠(250～300g)464只，随机分为2部分:(1)股神经、坐骨神经及自由基在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用;(2)股神经、坐骨神经及腺苷在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用。
　　结果:
　　1.股神经、坐骨神经及自由基在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用
　　1.1 LIP可部分逆转大鼠全脑缺血-再灌注导致的海马CA1区神经元损伤、发挥脑保护作用;而横断两侧股神经和/或坐骨神经或股静脉注射自由基清除剂DMTU均可部分阻断LIP的上述保护作用，横断两侧股神经及坐骨神经联合股静脉注射DMTU阻断作用更加明显，提示LIP诱导的脑缺血耐受有神经和体液因子自由基的共同参与。
　　1.2 免疫组化、Western blot结果显示，LIP上调脑缺血大鼠海马CA1区p-p38MAPK和p-ERK的表达、发挥脑保护作用有股神经、坐骨神经及体液因子自由基的共同参与。
　　2.股神经、坐骨神经及腺苷在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用
　　2.1 股神经、坐骨神经及腺苷A1受体拮抗剂在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用
　　2.1.1 大鼠脑缺血再灌注引起的海马CA1区神经元的损伤可被LIP明显减轻，分别或联合横断两侧股神经和坐骨神经或股静脉应用腺苷A1受体拮抗剂DPCPX均可部分阻断LIP的上述效应，而神经横断和股静脉注射同时应用时阻断作用明显增强，提示LIP诱导的脑缺血耐受有神经和体液因子腺苷共同参与。
　　2.1.2 ①免疫组化结果显示，全脑缺血sham组、BI组、LIP+BI组、FNT+LIP+BI组、SNT+LIP+BI组及FNT+SNT+LIP+BI组海马CA1区p-p38MAPK和p-ERK表达趋势同1.2①。与LIP+BI组比较，大鼠海马CA1区锥体神经元中p-p38 MAPK和p-ERK在DPCPX+LIP+BI组、DPCPX+FNT+LIP+BI组、DPCPX+SNT+LIP+BI组和DPCPX+FNT+SNT+LIP+BI组的表达量明显减低，细胞胞核染色较浅，p-p38MAPK的积分光密度分别为30.35±0.86、23.70±0.59、23.41±0.74和15.32±0.39，p-ERK的积分光密度分别为16.40±0.49、11.12±0.18、11.19±0.29、和9.45±0.30，p-p38 MAPK的阳性细胞总面积分别为9765.96±347.28、6668.90±354.16、6703.29±376.45和3528.92±395.46，p-ERK的阳性细胞总面积分别为4498.82±263.88、3165.54±233.04、3138.54±93.17和2161.92±120.90，均有统计学差异(P＜0.01)，以DPCPX+FNT+SNT+LIP+BI组最显著。②Western blot结果中p-p38MAPK和p-ERK在各组中表达趋势均与免疫组化结果相符。以上免疫组化、Western blot结果表明LIP通过神经途径和体液因子腺苷上调了脑缺血海马CA1区p-p38 MAPK和p-ERK表达。
　　2.2 股神经、坐骨神经及腺苷在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用
　　2.2.1 免疫组化、Western blot结果进一步表明神经途径和腺苷共同参与了LIP上调大鼠海马CA1区p-p38 MAPK和p-ERK的表达。
　　结论:
　　(1)LIP前横断两侧股神经和/或坐骨神经和/或股静脉注射自由基清除剂DMTU或腺苷A1受体拮抗剂DPCPX均可部分阻断LIP的脑保护作用，股静脉注射腺苷可以发挥类似LIP的脑保护作用。提示LIP通过股神经、坐骨神经、体液因子自由基及腺苷联合诱导了脑缺血耐受。
　　(2)LIP前横断两侧股神经和/或坐骨神经和/或股静脉注射自由基清除剂DMTU或腺苷A1受体拮抗剂DPCPX均可部分阻断LIP对p-p38MAPK和p-ERK表达的上调作用，而股静脉注射腺菅可上调脑缺血大鼠海马CA1区p-p38MAPK和p-ERK的表达，发挥类似LIP的脑保护作用。提示LIP可通过神经-体液机制影响脑缺血大鼠海马CA1区p-p38 MAPK和p-ERK的表达。

目录

声明

摘要

英文缩写

前言

材料与方法

1 主要实验仪器与试剂

2 实验动物及分组

3 肢体缺血预处理

4 全脑缺血动物模型的制备

5 股静脉内注射

6 股神经、坐骨神经横断术

7 取材、固定以及组织切片的制各

8 硫堇染色

9 脑组织病理学评价

10 海马CA1区的分离

11 免疫组织化学

12 Western blot

12 统计学分析

结果

1 股神经、坐骨神经、自由基在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用

2 股神经、坐骨神经及腺苷在LIP诱导的脑缺血耐受中的协同作用

附图

讨论

结论

参考文献

综述 脑缺血-再灌注损伤的研究进展

致谢

个人简历