同种异体富血小板血浆对兔骨缺损修复作用的实验研究

摘要

目的:
　　本实验旨在观察不同时间同种异体富血小板血浆联合同种异体骨植入对骨缺损修复的影像学和组织学变化，以探讨同种异体富血小板血浆对骨缺损植骨修复的疗效，从而为临床工作提供实验理论依据及指导意见。
　　方法：
　　1实验分组：选取健康新西兰大白兔36只，于兔的双下肢股骨内侧髁建立骨缺损的模型后按分笼饲养编号随机分为A、B两组，A组（实验组，n=18），同种异体骨复合同种异体富血小板血浆植入；B组（对照组,n=18），单纯植入同种异体骨，另取6只单纯建立骨缺损模型，缺损不做处理作为模型组。
　　2同种异体PRP的制备：心脏取血50ml，分别移入10ml离心管进行二次离心，第一次以200g离心力，离心10min，第二次同样以200g离心力离心，时间同上，制备PRP约1ml，将PRP与同种异体骨按2:1比例混合激活后，制成复合型PRP凝胶。
　　3血小板计数：心脏取血后，使用血细胞分析仪，取少量血液进行血小板计数，记录全血中血小板数，参考Landesberg法通过两次离心法制备PRP，同样对PRP进行血小板计数，验证二次离心法制备出的PRP是否满足实验要求。
　　4观察及评价指标：第4、8、12周时，采用过量麻醉的方法处死各组实验动物，首先设定特定的曝光条件摄股骨髁侧位X光片(距离1m，条件220KV,30mA．曝光时间0.15s)，观察骨缺损植骨愈合情况。参照Yang氏放射学评分标准进行评分，并通过X线平片测量记录其骨缺损区上、中、下三点的阻射密度值，取平均值进行统计分析。而后截取标本对其进行大体标本观察，观察植入材料的表面变化和骨组织缺损区域植入骨的生长修复情况。制作病理组织切片及免疫组化染色，光学显微镜下观察兔骨缺损再生与修复情况；并根据Lane氏组织学评分标准对每组动物的骨修复情况进行评分；应用显微图像分析系统（HMIAS-2000）和专业图像分析软件（Image-Pro Plus6.0）计算其免疫组化切片的染色阳性细胞平均光密度（Mean Optical Density，MOD）值,进行统计学分析。
　　结果：
　　1一般情况及大体观察：术后所有动物切口愈合良好，从缺损边界和骨痂形成情况，术后4周和8周时，A组比B组缺损区组织修复骨缺损较平整，修复较好，术后12周，A组和B组骨组织缺损区域均得到完全修复，边界已无法分辨，部分可见异位骨化；
　　2全血及PRP血小板计数情况：PRP中血小板数量为全血中的（4.30±0.28）倍，符合Landesberg法通过两次离心制备PRP的要求，满足了目前实验需求；
　　3影像学评分及观察结果：术后4、8、12周各时间点A组与B组两组放射学评分比较差异具有统计学意义（P<0.05），A组评分显著高于B组；而A组与B组两组术后各期X线阻射密度比较，A组阻射密度值优于B组，差异具有统计学意义（P<0.05）；
　　4组织学评分及镜下观察情况：术后4、8、12周各时期A组和B组Lane组织学评分比较，实验组评分均高于对照组，且比较差异具有统计学意义（P<0.05），光学显微镜下观察结果显示术后各时间点实验组成骨的面积均高于对照组，两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；而免疫组化观察结果显示第4和8周时A组PDGF、TGF-β免疫组化切片平均光密度（MOD）明显高于B组,比较差异具有统计学意义（P＜0.05），说明第4和8周时PDGF、TGF-β蛋白的表达量高于对照组；术后第12周时，PDGF、TGF-β蛋白的表达量均较第4和8周时下降，且实验组与对照组比较差异没有统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：
　　1同种异体富血小板血浆与异体骨组织复合后，能够促进骨组织生成，加快骨缺损修复。
　　2血小板源性生长因子（PDGF）和转化生长因子（TGF-β）于8周后显著下降，是早期诱导骨组织再生的重要生长因子。
　　3术后12周时模型组的骨缺损处仍未完全修复,证明实验模型成立。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1实验材料

2实验具体步骤和方法

3检测指标和方法

4统计学方法

结果

3大体观察

4影像学X线观察结果分析

5组织学观察结果及图像分析

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:富血小板血浆在骨组织缺损修复中的应用研究进展

致谢

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