姜黄素对糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的保护作用及机制探讨

摘要

目的：研究姜黄素对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的保护作用及机制探讨。 方法：将SD大鼠随机分为对照组、DN模型组、姜黄素低剂量组和姜黄素高剂量组。动物处死前24小时用代谢笼收集24小时尿液;然后第二天处死后取血和肾脏组织。留取血清和尿液标本用于检测血糖（BG）;尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）和尿白蛋白/肌酐（UACR）；采用HE染色检测肾脏组织的病理改变；采用分光光度计检测超氧化物歧化酶（SOD）、血清丙二醛（MDA）的含量；实时定量PCR检测各组中Nrf2、HO-1mRNA的表达情况；应用免疫组织化学法检测肾组织Nrf2蛋白表达情况；体外培养HK-2细胞;在不同刺激条件下;检测细胞培养上清中SOD和MDA含量；Western blot和实时定量PCR检测Nrf2和HO-1表达情况。 结果：大鼠生化指标结果显示;与对照组相比;DN组BG、BUN、Scr和UACR均明显升高;差异具有统计学意义；但使用姜黄素干预后BG、BUN、Scr和UACR含量下降;且呈剂量依赖性;差异具有统计学意义。HE染色结果显示;对照组大鼠肾小球结构清晰;肾小管形态规则；DN组大鼠肾小球结构模糊;可见大量炎性细胞浸润;肾小管胞质较浅;管腔大;呈空泡状；与DN组相比;姜黄素低剂量（LC）和姜黄素低剂量（HC）组肾脏损伤缓解;肾小球较清晰;肾小管水肿减退;其中HC组肾脏损伤缓解更明显。与对照组相比;DN组SOD含量降低;而MDA含量升高;差异有统计学意义（P<0.05）；与DN组相比;LC组和HC组SOD含量升高; MDA含量降低;其中HC组各项指标变化最为明显;差异有统计学意义（P<0.05）。实时定量PCR检测Nrf2 mRNA表达;结果显示;与对照组相比;高糖环境能促进Nrf2表达增加；在高糖刺激条件下;姜黄素能进一步促进Nrf2 mRNA表达;呈剂量依赖性;差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫组化染色显示;各组大鼠肾脏组织均表达Nrf2；DN组大鼠肾脏Nrf2蛋白表达水平明显高于对照组；HC组可见大量强阳性棕褐色颗粒;明显高于DN组和LC组;差异具有统计学意义（P<0.05）。通过检测HK-2细胞培养上清;结果显示;对照组（A组）相比;高糖组（B组）SOD含量降低;MDA含量升高;差异有统计学意义（P<0.05）；与B组相比;高糖+5μM姜黄素（C组）和高糖+25μM姜黄素（D组）SOD含量升高;MDA含量降低;其中D组各项指标变化最为明显;差异有统计学意义（P<0.05）。与A组相比;B组中Nrf2表达升高；高糖与姜黄素共同刺激时;Nrf2表达进一步升高;呈剂量依赖性;差距具有统计学意义（P<0.05）。实时定量PCR和Western blot结果显示;与对照组相比;在Nrf2激活剂刺激的条件下; HO-1 表达升高;且成剂量依赖性;差距具有统计学意义（P<0.05）。 结论：姜黄素可通过Nrf2/HO-1通路缓解糖尿病肾病大鼠肾脏损伤。

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