花粉细胞异三聚体G蛋白的存在及其在细胞外CaM信号转导中的作用

摘要

作者室前期实验结果表明,异三聚体G蛋白可能参与了细胞外CaM启动并促进花粉萌发和花粉管伸长过程的调节;该文设计实验提供直接证据表明花粉质膜上异三聚体G蛋白的存在及其在上述跨膜信号转导中与细胞外CaM的上下游的偶联关系.首先以百合花粉质膜全蛋白为材料,用放射自显影的方法,通过ADP-核糖基化实验,检测出了受细菌毒素(PTX及CTX)诱导的异三聚体G蛋白Gα亚基的特异性条带,确定其分子量为41KDa;并且证实此Gα亚酸被诱导的核糖基化程度与细菌毒素呈剂量关系,为作者室首次在花粉中检出异三聚体G蛋白提供了又一直接的证据.建立了检测G蛋白内源GTPase活性的荧光测定方法.此外根据以上工作,作者推测细胞外CaM的膜受体很有可能是一种G蛋白偶联型的受体,为进一步的受体研究打下良好基础.

目录

缩写表

文献综述 G蛋白与植物细胞跨膜信号转导

1.G蛋白的种类

2 G蛋白的活化机制

3.G蛋白的检测方法

4.植物中的G蛋白及其研究方法

5.G蛋白与植物细胞跨膜信号转导

6.植物细胞G蛋白偶联受体研究进展

7.展望

前言

材料与方法

一、实验材料

二、试剂

三、实验方法

1.花粉原生质体的分离、纯化及鉴定

2.花粉正向型质膜囊泡的制备和纯化

3.花粉正向型质膜囊泡纯度的标志酶及电镜检测

4.细菌毒素诱导的异三聚体Gα的ADP-核糖基化

5.质膜异三聚体G蛋白GTPase活性的荧光法测定

6.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

7.植物CaM的制备

8.质膜蛋白含量的测定

实验结果与分析

一、原生质体的分离纯化及鉴定

二、花粉正向型质膜囊泡的制备和纯度检测

1.标志酶检测

2.电镜检测

三、细菌毒素诱导的花粉质膜异三聚体Gα的ADP-核糖基化

四、细胞外CaM对花粉质膜异三聚体G蛋白GTPase活性的影响

1.GTPase活性荧光法测定的标准曲线

2.外源纯化CaM对质膜囊泡GTPase活性的影响

3.PTX、CTX对GTPase活性的影响

4.GTP非水解类似物GTP[γS]及GMP-PCP对质膜囊泡GTPase活性的影响

讨论

参考文献

结论

附录

个人简历

致谢