长角血蜱卵巢发育中交配效应的研究

摘要

蜱类属于节肢动物,是一种专性吸血的外寄生动物。它作为一种重要的媒介动物,其分布范围广泛,宿主种类也较多。它具有很强的繁殖能力,可以传播多种疾病,对人类健康和畜牧业生产造成极大的危害,这已经引起了许多科学家的密切关注。蜱类生殖生理学一直是本领域的研究热点。吸血和交配是蜱类生殖过程中的两种重要生理习性。雌雄个体发生交配后,导致雌性在生理和行为方面发生一系列相关的变化,即发生了交配效应。长角血蜱Haemaphysalis longicornis是广泛分布于河北省的优势蜱种之一,本课题以长角血蜱作为研究对象,对雌蜱卵巢发育过程中的交配效应进行相关研究。
　　本实验通过对交配后(饱血当天)雌蜱的生理指标进行测定,发现其体重约是未交配(吸血时间和饱血时间相同)时期的10倍,卵巢重量及其卵巢蛋白含量均为未交配雌蜱的3倍。利用透射电镜观察卵巢的超微结构,发现交配后雌蜱的卵巢与未交配时期相比有明显差异。其卵母细胞中粗面内质网、线粒体、脂滴和糖原颗粒数量比未交配时期显著增加。运用分子生物学的方法成功构建了卵巢抑制消减cDNA文库,通过对文库中部分的克隆进行测序和比对分析,得到了33个EST(Expressed Sequence Tag)。BlastX分析显示,所得cDNA编码的功能性蛋白主要包括酶类、糖类代谢、能量代谢、转录调节及蜱体内信号传递等相关蛋白,这些蛋白大多与蜱类的生殖发育关系密切。此外用SDS—PAGE方法分析交配后的卵巢全蛋白,检测到了三条差异性蛋白条带,并采用高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)对其进行分析,鉴定出4种蛋白,其中2种与长角血蜱中赖氨酸-酮戊二酸还原酶/酵母氨酸脱氢酶(LKR/SDH)和Cyclophilin A蛋白有较高同源性,另外2种和变异革蜱的卵黄蛋白具有一定的同源性。