硬蜱卵蜡层抑菌分子研究

摘要

蜱类专性吸血，体外寄生，能够作为多种人兽共患自然疫源性疾病的传播媒介和贮存宿主，对人类健康、野生动物和畜牧业生产危害极大，因此对其研究具有重要的经济学意义和公共卫生学意义。蜱类生活史复杂，包括卵、幼蜱、若蜱和成蜱四个阶段，卵由于缺乏运动能力是其生活史中最脆弱的阶段，易受环境条件和微生物的影响，因此本研究通过抑菌实验对森林革蜱（Dermacentor silvarum）（采自河北张家口）、亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum）（采自新疆）、长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）（两性生殖种群来自河北张家口，孤雌种群采自四川苍溪）和钝刺血蜱(H.doenitzi)（采自四川苍溪）的卵进行抑菌活性分析，并利用氯仿/甲醇(v/v=2∶1)和水对卵蜡层活性物质进行抽提，在确定抑菌活性基础上，通过气相色谱、高效液相色谱及质谱对卵蜡层有机相和水相提取物中抑菌活性物质进行了初步的分离鉴定，结果表明:
　　1、森林革蜱和亚洲璃眼蜱的卵能够抑制绿脓杆菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌的生长，而不能够抑制粪肠球菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌的生长;长角血蜱（两性、孤雌种群）和钝刺血蜱卵能够抑制粪肠球菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌的生长，而不能够抑制绿脓杆菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌的生长;脱去卵蜡层的卵对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都没有抑制作用。
　　2、经氯仿/甲醇(2∶1)和水抽提后，森林革蜱和亚洲璃眼蜱卵的有机相提取物能够抑制金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌的生长，对大肠杆菌等革兰氏阴性菌没有抑制作用;长角血蜱（两性、孤雌种群）和钝刺血蜱卵的有机相提取物对大肠杆菌等革兰氏阴性菌有抑制作用，对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌没有抑制作用。
　　3、森林革蜱和亚洲璃眼蜱卵蜡层有机相提取物中主要包括中性脂、磷脂以及糖脂/脂肪酸，其中糖脂/脂肪酸部分具有抑菌活性，通过气相色谱/质谱分析，在森林革蜱和亚洲璃眼蜱卵蜡层有机相提取物中鉴定出的不饱和脂肪酸C18∶2(C18H28O3)具有抑菌活性。
　　4、经氯仿/甲醇(2∶1)和水抽提后，森林革蜱和亚洲璃眼蜱卵的水相提取物抑制金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌的生长，对大肠杆菌等革兰氏阴性菌没有抑制作用;长角血蜱（两性、孤雌种群）和钝刺血蜱卵的水相提取物抑制大肠杆菌等革兰氏阴性菌的生长，对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌没有抑制作用。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 抗菌肽简介

1．1．1 抗菌肽的来源

1．1．2 昆虫中抗菌肽的研究进展

1．2 蜱类抗菌活性物质的研究进展

1．2．1 蜱源抗菌肽

1．2．2 蜱源非蛋白类抗菌物质

1．2．3 蜱类卵表抑菌活性物质

1．3 脂肪酸抑菌研究进展

1．4 结语

第二章 硬蜱卵及卵蜡层抑菌活性分析

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 测试细菌

2．1．3 实验试剂及耗材

2．1．4 实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 蜱的饲养与卵的收集

2．2．2 蜱类卵蜡层提取

2．2．3 蜱类卵及卵蜡层提取物抑菌活性检测

2．3 实验结果

2．3．1 蜱类卵及卵蜡层有机相和水相提取物的抑菌活性

2．4 讨论

第三章 硬蜱卵蜡层有机相提取物抑菌分子研究

3．1 实验方法

3．1．1 蜱类中脂类分级抽提及活性分析

3．1．2 蜱类气相色谱／质谱(GC／MS)分析

3．1．3 脂肪酸标准品的抑菌活性分析

3．2 实验结果

3．2．1 有机提取物脂类组成及抑菌活性

3．2．2 有机相提取物气相色谱／质谱分析

3．2．3 不同浓度脂肪酸标准品的抗菌活性

3．3 讨论

第四章 硬蜱卵蜡层水相提取物抑菌活性分析

4．1 材料与方法

4．1．1 水相提取物热稳定性和pH稳定性分析

4．1．2 水相提取物抑菌效果分析

4．1．3 水相提取物的电泳分析

4．1．4 水相提取物电泳凝胶抑菌分析(geloverlay assay)

4．1．5 水相提取物高效液相色谱纯化(HPLC)

4．2 结果

4．2．1 水相提取物热稳定性和pH稳定性

4．2．2 MIC和MBC的测定

4．2．3 水相提取物的SDS-PAGE和PAGE凝胶抑菌分析

4．2．4 水相提取物高效液相色谱

4．3 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

个人简历