新城疫病毒B株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与表达

摘要

为控制新城疫的爆发,急需研制基因工程苗.为此,从澳大利亚某大学兽医病理系引进一株NDV热稳定性天然弱毒B95株,并选取其表面抗原血凝素-神经氨酸酶的编码基因为目的基因,根据国外已发表的序列,设计一对引物,利用RT-PCR技术扩增出了NDVB95株HN基因.经琼脂糖电泳检测,将大小与预计分子量一致的片段纯化后连接到PGEM-T-easy克隆载体中,再转化大肠杆菌TGI感受态细胞,得到的转化子经分子量比较、PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆.经Western-bloting杂交实验,纯化出目的的蛋白与兔抗NDVB95株抗体反应,说明表达产物确为NDVB95株HN蛋白,且具有一定的免疫原性,为进一步研究重组疫苗创造了一定的条件.

目录

独创性声明

摘要

文献综述

引言

材料与方法

1实验材料

2实验方法

结果与分析

讨论

结论

参考文献

附录

B95株HN蛋白blast分析

B95株HN蛋白跨膜位点分析

Lasota株HN蛋白跨膜位点分析

F48E9株HN蛋白跨膜位点分析

致谢