25S rDNA基因在部分大白菜初级三体上的FISH定位

摘要

初级三体是进行基因定位、染色体物理图谱构建和染色体工程研究等的重要基础材料,但目前国内外关于大白菜三体,单体的研究较少.该研究从获得的三体材料中利用去壁低渗的方法对2号,8号,10号染色体的三体和3号,6号染色体的双三体的根尖有丝分裂中期染色体的核型分析进一步明确鉴定,在此基础上采用荧光原位杂交技术进行研究,并进行了拟南芥25S rDNA在大白菜初级三体上的基因定位.重复序列是研究物种起源和进化最有效手段之一,而高等植物中都存在重复序列,因而研究25S rDNA在大白菜不同三体上的分布,有助于在分子水平上研究种内的微观进化.25S rDNA是芸薹属中的与核糖体RNA基因合成有关的一个中度重复序列,利用荧光原位杂交技术,可准确分析这个重复序列在大白菜不同三体上的分布情况,结果如下:1.通过有丝分裂中期核型分析,进一步明确鉴定9408-2为2号三体,9408-3为8号三体,9408-4为1 0号三体,9408-5为3号,6号双三体.2.25S rDNA在2号染色体三体植株上共有5个杂交位点,有2个杂交位点分别分布在2号染色体上近中着丝粒的异染色质区,杂交信号强度较弱,另外一条同源条染色体上没有杂交信号;3号染色体的长臂的中部,有1个杂交位点,杂交信号很弱,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;随体染色体的随体及次缢痕处,有2个杂交位点分别分布在两条同源染色体上,而且在随体上有很强的杂交信号.3.在8号染色体三体植株上共有7个杂交位点,1号染色体的短臂的端部有较强的杂交信号,有1个杂交位点,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;2号染色体上有一条同源染色体上近着丝粒处的两侧有2个杂交位点,并且杂交信号较强,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;在3号染色体上有2个杂交位点分别分布在两条同源染色体的近着丝粒处,杂交信号较弱;6号染色体上有1个杂交位点,分布在长臂的近着丝点处,杂交信号强度中等,另外一条同源染色体上没有杂交信号检出;在随体染色体上有1个强的杂交信号,分布在随体处,在另外一条同源染色体上由于随体、次缢痕的丢失导致rDNA位点的丧失.4.在随体染色体三体植株上有共6个杂交位点,2号染色体的一条同源染色体上长臂近着丝粒处有较强的杂交信号,有1个杂交位点,另外一条同源染色体上近着丝粒处两侧都有杂交位点杂交信号较强.在3号染色体上长臂的中部有1个弱的杂交位点,分布在长臂的近着丝粒处,另外一条同源染色体上没有杂交位点检出.随体染色体上有2个强的杂交信号,分别分布在两条染色体的随体处,还有一条随体染色体由于随体的丢失导致rDNA位点的丧失.5.在3号,6号染色体双三体上共有6个杂交位点.在三条3号同源染色体的长臂上近着丝粒处分别有1个杂交位点,杂交信号较弱;在两条随体染色体上有2个杂交位点分别分布两条同源染色体的随体处,杂交信号较强,还有一个杂交位点分布在一条随体染色体的近着丝粒处.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明和关于论文使用授权的说明

1引言

1.1原位杂交技术的发展

1.2重复序列及核糖体基因在芸苔属定位的意义

1.3芸薹属的比较基因组的研究进展

1.4本试验的目的和意义

2材料与方法

2.1供试材料

2.1.1植物材料

2.1.2供试菌株

2.1.3目的探针

2.2试验方法

2.2.1根尖中期染色体的制片

2.2.2核型分析

2.2.3探针DNA的制备

2.2.4探针DNA的标记

2.2.5探针的纯化

2.2.6标记探针的效率检测

2.2.7原位杂交

2.2.8染色体玻片的观察及图像处理

3结果与分析

3.1三体及双三体的核型分析

3.2探针扩增的结果与分析

3.2.1质粒DNA的转化

3.2.2质粒DNA的检测结果

3.2.3 PCR扩增中Mg2+和模板DNA用量的筛选结果

3.2.4 DNA片段的回收与回扩

3.2.5 DNA的纯度和浓度的测定

3.3荧光原位杂交结果

3.3.1 25S rDNA在大白菜三体上的定位结果

3.3.2荧光原位杂交技术参数的选择结果

4讨论

4.1 rDNA位点的多态性

4.2 rDNA在芸薹属的核型分析上的应用

4.3大白菜原位杂交技术问题的探讨

4.3.1染色体制片

4.3.2固定染色体

4.3.3变性条件的筛选

4.3.4杂交湿盒改进

4.3.5杂交后的正确洗脱程序

4.3.6复染

5结论

6参考文献

7附录

8在读期间发表的学术论文

9作者简历

10致谢