柿（Diospyros kaki Thunb.）优良品种AFLP指纹图谱构建及遗传多样性研究

摘要

该研究在建立柿AFLP分析的银染技术体系的基础上,构建了109个柿优良品种的DNA指纹图谱,对其遗传多样性进行了分析,并初步构建了柿优良品种的核心种质.1 柿树组织中富含单宁、多糖、酚及色素等物质,适于AFLP分析的柿基因组DNA提取方法为改良CTAB法,提取液为100mmol/L Tris-HCl,pH8.0;20mmol/L EDTA;1.4mol/L NaCl;2％CTAB;1%PVP40;10mmol/LNa<,2>S<,2>O<,5>;100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入).采用该方法提取的柿叶片DNA,经纯化后质量和纯度较高,可用于AFLP分析.2 通过对各主要影响因素的研究,建立了适于柿树AFLP分析的银染技术体系.3 从64对引物组合(EcoRⅠ引物和MseⅠ引物个8个)中筛选出20对多态性高、谱带清晰的引物组合用于供试材料的AFLP分析.20对引物共扩增出1000条清晰可辨的谱带,其中多态性带887条,占88.7%.供试材料不同种和类型(涩柿、甜柿、君迁子、油柿和浙江柿)间多态性带所占比例不同.4 用20对引物组合构建了120份供试材料的基因型指纹,采用二岐分类法可以将供试的120份材料一一区分开,并且部分材料基因型分别拥有自己的特征带,可以作为该材料基因型鉴定的依据.5根据研究结果确定了品种划分的遗传距离,并确定五峰牛心柿、干帽盔和舟曲牛心柿为同一品种;暑黄柿与灰柿为同一品种,老皮革与舟曲火柿为同一品种,而磨盘柿和帽儿柿也为同一个品种,以上品种均为同物异名.6 聚类分析将供试材料分为两大类群和六个亚类,结果表明甜柿品种与涩柿品种在聚类结果上没有明显界限,聚类结果与品种地理来源也没有明显的联系,君迁子、油柿和浙江柿单独聚为一个亚类,与柿品种亲缘关系较远.7 采用逐步聚类分组法,以多态性带为主要指标,结合形态分类学指标及地理来源,构建了供试品种的核心种质,包括襄阳牛心柿、襄汾扁柿、老皮革、小广团柿、八月红、磨盘柿、罗阳甜柿、五花柿、鲁山牛心柿、火晶柿和南化牛心柿等11个品种,遗传多样性与形念分类学分析结果表明,所构建的核心种质符合核心种质的要求.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明和关于论文使用授权的说明

1引言

2材料和方法

2.1试验材料

2.2试验方法

2.2.1适于AFLP分析的柿基因组DNA提取方法的研究

2.2.2柿基因组DNA的鉴定方法

2.2.3柿AFLP分析银染技术体系的建立

2.2.4引物筛选

2.2.5电泳结果统计

2.2.6数据处理与分析

2.2.7供试柿品种核心种质的建立

2.2.8核心种质的遗传多样性评价

2.3主要试剂及配制

2.3.1主要试剂

2.3.2试剂配制

3结果与分析

3.1适于AFLP分析的柿基因组DNA提取方法

3.1.1不同处理的提取效果

3.1.2柿基因组DNA的提取效果

3.2柿AFLP分析银染技术体系的建立

3.2.1酶切

3.2.2连接

3.2.3预扩增体系

3.2.4选择性扩增体系

3.2.5柿AFLP分析银染技术体系

3.3引物筛选

3.4供试材料的AFLP指纹图谱

3.4.1多态性带

3.4.2特征带与种质鉴定

3.5供试材料的遗传多样性分析

3.5.1遗传距离

3.5.2聚类分析

3.6供试柿品种核心种质的构建及遗传多样性评价

4讨论

4.1关于柿的AFLP分析银染技术体系

4.2柿优良品种的AFLP指纹图谱

4.3柿优良品种的遗传多样性及品种鉴定

4.4关于柿树的核心种质

5结论

6参考文献

7附录

8在读期间发表的学术论文

9作者简历

10致谢

附录