CBF1基因转化地被石竹及其抗寒性评价

摘要

本试验以地被石竹(Dianthus chinese)为试验材料，将从拟南芥(Arabidopsis)中获得的CBF1基因通过农杆菌(Agrohacterium)介导的叶盘法进行了遗传转化，并对其进行了PCR检测，获得了4个转基因株系。同时，对转基因植株的抗寒性——经低温胁迫，离体叶片的相对电导率、游离脯氨酸含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶的活性进行了初步的评价。以期获得抗寒性得到提高的转基因地被石竹。 主要研究结果如下： 1．对于获得的28个抗性株系进行了PCR检测，其中4个株系的DNA经扩增后产生了与阳性对照相同的特异扩增条带，其片段大小约为640bp。这初步表明外源基因已整合进地被石竹转化植株的基因组中。 2．经低温胁迫后，随着温度的下降，叶片相对电导率呈“S”型上升趋势，转基因株系比对照株系(CK)的相对电导率在各温度下均较低；-20℃时对照株系的相对电导率的上升幅度最大，达到505.03％，而转基因株系27的上升幅度最小，为439.84％。-16℃时，CK与株系27差异极显著，CK与株系18差异显著；-20℃下，CK与株系27差异极显著，与株系12、18差异显著。 3．对照植株在低温胁迫下，随着温度不断下降，脯氨酸含量上升幅度最大，达到了975.35％;各转基因株系12、18、25、27的脯氨酸含量上升幅度均小于对照株系，分别为823.01％、747.59％、568.59％和531.28％，转基因株系27最小。在各低温处理下，转基因株系27的脯氨酸含量比对照株系高出50％～200％。从-4℃到-16℃，各株系脯氨酸含量增幅都较大，均在100％左右，到-20℃时，增幅有所减小，降低到50％左右。 4．经过不同低温处理后，各株系的丙二醛含量均有所增加。从0℃到-20℃，对照株系的丙二醛含量的增加量，各温度下分别为80.23％，12.14％，40.7％，39％以及33.42％，-4℃时增幅较大，其他温度下增幅比较平缓。转基因各株系在各温度下丙二醛的增长量相对较平缓，特别是从-8℃开始增长量只有20％左右。 5．经过低温胁迫后，各转基因株系和对照株系的SOD活性表现为随着温度的上升而增加，到-12℃时达到高峰，在-16℃时SOD活性又有所下降，达到峰值时，各株系的SOD活性分别为7.7、14.67、15.21、12.32和15.87 U/g。-12℃时，CK与各转基因株系SOD活性差异极显著，各转基因株系之间SOD活性差异不显著。

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文摘

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论文说明：缩略词表

声明

1引言

1.1低温胁迫对植物的影响

1.2石竹科植物遗传转化的研究进展

1.2.1遗传转化方法

1.2.2导入的目的基因

1.3抗寒相关基因

1.3.1与抗寒相关基因及其主要功能

1.3.2 CBF1转录因子

1.4植物抗寒性机理

1.5展望

2农杆菌介导CBF1基因转化地被石竹及PCR分子鉴定

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1转基因植株的获得

2.2.2转基因植株基因组DNA的提取

2.2.3转基因植株的PCR检测

2.3讨论

2.3.1 DNA提取需注意问题：

2.3.2抗生素的无菌处理

2.3.3共培养时间的选择

2.3.4不定芽的筛选

2.3.5转化效率的提高

3转基因地被石竹抗寒生理指标的测定及其抗寒性评价

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2抗寒性生理指标的测定方法

3.2结果与分析

3.2.1不同低温处理对转基因植株相对电导率的影响

3.2.2不同低温处理转基因植株脯氨酸含量的测定

3.2.3不同低温处理对转基因植株丙二醛(MDA)含量的影响

3.2.4不同低温处理对转基因植株超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响

3.2.5转基因植株抗寒性冷冻恢复生长试验

3.2.6抗寒性综合评定结果

3.3讨论

4结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

发表论文1

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