药物活性成份在线富集毛细管电泳分析方法及其与生物大分子之间相互作用的研究

摘要

本论文将毛细管电泳分离技术与在线推扫富集技术、中空纤维液相微萃取技术相结合，建立了中草药和生物样品中的马钱子生物碱、卡马西平的高效、灵敏和选择性好的CE分离检测方法。并研究了中草药中的马钱子生物碱、防己生物碱、槲皮素以及卡马西平与血清白蛋白的相互作用。在系统查阅有关文献资料的基础上，进行了以下研究工作： (1)采用在线推扫预富集一胶束毛细管电泳法建立了测定中草药中马钱子生物碱的新方法。经过实验优化，最佳分离条件为：分离缓冲溶液为50 mmol L<'-1> H<,3>PO<,4>(pH 2.0)，100 mmol L<'-1> SDS，20％乙腈(v/v)，分离电压-20 kV，在0.5 psi下进样270 s，检测波长为203 nm。与传统MEKC方法相比较，灵敏度提高了100倍(以峰高计)。以小檗碱为内标，士的宁与马钱子碱的浓度在0.5～15 μg/mL范围内与其峰面积与内标峰面积的比值呈良好的线性关系，线性相关系数分别为0.998和0.997，检出限分别为0.05 μg/mL和0.07 μg/mL。本方法应用于测定中草药马钱子和中药制剂伸筋活络丸中马钱子碱的含量，获得满意结果。 (2)首次将中空纤维液相微萃取(HF-LPME)与在线推扫富集胶束电动色谱法相结合，建立了测定尿样中马钱子生物碱的新方法。以小檗碱为内标，士的宁、马钱子碱与内标峰面积的比值与分析物浓度在20～200 ng/mL范围内呈良好的线性关系，线性相关系数分别为0.996和0.997，士的宁与马钱子碱的检出限分别为1 ng/mL和2 ng/mL(S/N=3：1)。 (3)建立了在线推扫富集毛细管电泳紫外检测测定药物和人血清中卡马西平浓度的方法。以pH=3.0的50 mmol L<

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要符号缩写表

声明

1引言

1.1毛细管电泳分析简介

1.1.1毛细管电泳的基本原理

1.1.2毛细管电泳在线富集技术

1.2中空纤维液相微萃取技术研究进展

1.2.1基于中空纤维的液相微萃取的装置

1.2.2基于中空纤维的液相微萃取的模式

1.2.3基于中空纤维的液相微萃取的应用

1.3药物与生物大分子相互作用研究进展

1.4本研究的意义和目标

2在线推扫—胶束电动毛细管电泳法测定中草药中的马钱子碱

2.1实验部分

2.1.1仪器与试剂

2.1.2电泳条件

2.1.3样品制备

2.2结果与讨论

2.2.1样品基质的选择

2.2.2分离缓冲溶液浓度的影响

2.2.3 pH值的影响

2.2.4有机溶剂浓度的影响

2.2.5 SDS浓度的影响

2.2.6分离电压的影响

2.2.7进样时间的影响

2.2.8在线推扫方法的富集倍数

2.2.9线性范围、重现性与检出限

2.2.10样品测定

2.3结论

3中空纤维液相微萃取—在线推扫胶束电动色谱法测定尿样中马钱子生物碱

3.1实验部分

3.1.1仪器与试剂

3.1.2中空纤维液相微萃取方法

3.1.3电泳条件

3.2结果与讨论

3.2.1基于中空纤维的液相微萃取的基本原理

3.2.2中空纤维液相微萃取的条件优化

3.2.3尿样分析

3.3结论

4在线推扫胶束电动毛细管色谱法分析药片和人血清中卡马西平

4.1实验部分

4.1.1仪器与试剂

4.1.2电泳条件

4.1.3样品处理

4.2结果与讨论

4.2.1缓冲溶液浓度的影响

4.2.2 pH值的影响

4.2.3有机溶剂的影响

4.2.4 SDS浓度的影响

4.2.5分离电压的影响

4.2.6进样时间的影响

4.2.7在线推扫方法的富集倍数

4.2.8线性范围、重现性和检出限

4.2.8样品分析

5毛细管电泳法测定血清中的左旋多巴和甲基多巴

5.1试验部分

5.1.1仪器与试剂

5.1.2试验方法

5.2结果与分析

5.2.1缓冲溶液的选择

5.2.2分离时间和进样时间的影响

5.2.3线性范围、重现性和检出限

5.2.4血清样品分析

5.3结论

6马钱子碱与牛血清白蛋白相互作用的研究

6.1实验部分

6.1.1仪器和试剂

6.1.2试验方法

6.2结果与讨论

6.2.1马钱子碱对BSA的内源性荧光猝灭机理

6.2.2马钱子碱与BSA的表观结合常数KA以及结合位点数n

6.2.3药物与BSA之间作用类型

6.3结论

7防己诺林碱和粉防己碱与牛血清白蛋白的相互作用

7.1实验部分

7.1.1仪器与试剂

7.1.2实验方法

7.2结果与讨论

7.2.1荧光猝灭光谱

7.2.2荧光猝灭机理

7.2.3防己诺林碱和粉防己碱与BSA的表观结合常数KA以及结合位点数n

7.2.4防己诺林碱和粉防己碱与BSA的结合距离r

7.2.5防己诺林碱和粉防己碱与BSA之间的作用力类型

7.2.6同步荧光光谱

7.2.7三维荧光光谱

7.3结论

8防己诺林碱和粉防己碱与人血清白蛋白的相互作用

8.1实验部分

8.1.1仪器与试剂

8.1.2试验方法

8.2结果与讨论

8.2.1荧光猝灭光谱

8.2.2荧光猝灭机理

8.2.3防己诺林碱和粉防己碱与HSA的表观结合常数KA以及结合位点数n

8.2.4防己诺林碱粉防己碱与HSA的结合距离r

8.2.5防己诺林碱和粉防己碱与HSA之间的作用力类型

8.2.6同步荧光光谱

8.2.7三维荧光光谱

8.3结论

9槲皮素与牛血清白蛋白相互作用的研究

9.1实验部分

9.1.1仪器与试剂

9.1.2实验方法

9.2结果与讨论

9.2.1槲皮素对BSA荧光的猝灭

9.2.2槲皮素与BSA的表观结合常数KA以及结合位点数n

9.2.3槲皮素在BSA上结合位置的求取

9.2.4荧光猝灭过程中热力学函数的变化与作用力的判断

9.3结论

10荧光光谱法研究卡马西平与牛血清白蛋白相互作用

10.1实验部分

10.1.1仪器和试剂

10.1.2试验方法

10.2结果与讨论

10.2.1荧光猝灭光谱

10.2.2结合常数KA以及结合位点数n

10.2.3药物与BSA氨基酸残基间的结合距离

10.2.4药物与BSA之间作用类型

10.3结论

结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

发表论文一

发表论文二

作者简历

致谢