米糠多糖的分离提取及对人工感染IBDV雏鸡免疫功能的调节作用

摘要

本文研究了米糠多糖的分离提取工艺、组成成分和对小鼠的急性毒性作用，以及米糠多糖对雏鸡感染IBDV后免疫功能的影响。 采用高温水提法，以不同提取时间和不同料水比进行提取条件优化，考察米糠多糖的得率。将高温提取液用α--淀粉酶除去淀粉、三氯乙酸去除蛋白质、10％Caq(OH)2除去植酸、乙醇沉淀多糖等--整套方法提纯米糠多糖。结果显示，100℃，5h，1:8时得糖率最高，为0.76％.并用葸酮-硫酸法、凯氏定氮法、烘箱干燥法、灼烧法、索氏提取法、碘试剂法分别测定提取物中各成份含量，测定结果为，多糖含量86.30％，蛋白含量2.30％，水分含量10.30％，粗灰分含量1.45％，不含脂肪和淀粉。紫外光谱分析结果显示，在200nm处有明显的吸收峰，证实提取物是多糖而不是蛋白质和核酸。对提纯的米糠多糖进行动物急性毒性试验，结果表明米糠多糖对小鼠无严重急性毒性危害。 给雏鸡服用不同剂量米糠多糖并人工感染法氏囊病毒(IBDV)，探讨米糠多糖的免疫调节活性。将10日龄健康京白939雏公鸡250只，随机平均分为5组，每组50只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为米糠多糖处理组，Ⅳ、Ⅴ组分别为攻毒对照组和空白对照组。10日龄开始用药，Ⅰ～Ⅲ组鸡灌服规定剂量RBP，剂量为50mg/kg.d)，100mg/(kg.d)，200mg/(kg.d)；Ⅳ、Ⅴ组灌服生理盐水，1ml/只；连续服用5d。15日龄时，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组接种IBDV(100xIDso)，0.1ml/只；Ⅴ组肌肉注射生理盐水，0.1ml/只。15日龄，Ⅰ～Ⅴ组鸡肌肉注射20％的绵羊红细胞(SRBC)悬液，0.5ml/只；Ⅰ～Ⅴ组鸡均实施ND疫苗免疫，ND疫苗免疫一周后实施AI疫苗免疫。攻毒后观察雏鸡发病率和死亡率。在攻毒前1d和攻毒后的7d、14d和21d，分别检测淋巴细胞增殖活性、自然杀伤细胞活性、白介素2活性、SRBC抗体、ND抗体和AI抗体滴度，同时采新鲜脾脏和法氏囊组织制备病理切片。结果表明，(1)雏鸡服用50 mg/(kg.d)～200mg/(kg.d)米糠多糖，连续5d，人工接种IBDV的发病率和死亡率均低于IBDV攻毒对照组；(2)不同剂量的米糠多糖用药组在试验期内的不同时间段淋巴细胞增殖活性、NK细胞活性、IL-2活性不同程度高于IBDV攻毒对照组(P<0.05或P<0.01)，到试验结束期基本能够达到健康对照组的水平；(3)在体液免疫方面，高剂量米糠多糖组抗绵羊红细胞抗体效价、ND和AI抗体效价显著高于IBDV对照组(P<0.01或P<0.05)，中、低剂量组效果不明显。(4)米糠多糖用药组鸡的法氏囊和脾脏的病理性损伤较IBDV对照组有所减轻。 试验证实，口服高剂量米糠多糖能够促进IBDV感染雏鸡的淋巴细胞增殖、提高NK细胞活性、促进IL-2的产生；促进抗绵羊红细胞抗体的产生，提高IBDV感染雏鸡对ND、AI疫苗的免疫应答；缓解IBDV对雏鸡免疫器官的病理性损伤。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

1引言

1.1鸡传染性法氏囊病毒引起机体免疫抑制的研究

1.1.1传染性法氏囊病毒对鸡的致病作用

1.1.2传染性法氏囊病毒的免疫抑制机理

1.2植物多糖的生物活性研究概述

1.2.1植物多糖的抗肿瘤作用

1.2.2植物多糖的免疫调节作用

1.2.3植物多糖的抗病毒作用

1.2.4植物多糖的抗突变、降血糖降血脂作用

1.3米糠多糖的研究概述

1.3.1米糠多糖的抗肿瘤活性

1.3.2米糠多糖的免疫调节活性

1.3.3米糠多糖降低血糖、血脂利胆固醇的功能

1.3.4米糠多糖的抑菌活性

1.3.5米糠多糖在研究、开发与应用中存在的问题

1.4研究目的与意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1米糠

2.1.2试验动物

2.1.3主要仪器设备

2.1.4药品及试剂

2.1.5试剂配制

2.2试验方法

2.2.1米糠多糖的提取及工艺优化

2.2.2米糠多糖的成分测定

2.2.3米糠多糖的急性毒性试验

2.2.4米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡免疫功能的调节作用

2.2.5米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡免疫器官的病理学观察

2.2.6米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡ND和AI抗体的检测

2.3数据处理

3结果

3.1不同提取条件对米糠多糖得率的影响

3.2米糠多糖成分的检测结果

3.2.1总糖含量

3.2.2其它成分分析

3.2.3紫外光谱分析

3.3米糠多糖的急性毒性试验

3.4米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡免疫功能的影响

3.4.1米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡发病率和死亡率的影响

3.4.2米糠多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖作用的影响

3.4.3米糠多糖对鸡脾脏NK细胞活性的影响

3.4.4米糠多糖对鸡脾脏IL-2的活性的影响

3.4.5米糠多糖对鸡抗绵羊红细胞抗体滴度的影响

3.5米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡脾脏与法氏囊病理损伤的影响

3.6米糠多糖对ND和AI疫苗免疫效果的影响

3.6.1米糠多糖对ND疫苗免疫效果的影响

3.6.2米糠多糖对AI疫苗免疫效果的影响

4讨论

4.1不同提取条件对米糠多糖得率的影响

4.2米糠多糖对小鼠急性毒性作用

4.3米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡免疫功能的影响

4.3.1米糠多糖对人工感染IBDV雏鸡发病率和死亡率的影响

4.3.2米糠多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖作用的影响

4.3.3米糠多糖对鸡脾脏NK细胞活性的影响

4.3.4米糠多糖对鸡脾脏IL-2的活性的影响

4.3.5米糠多糖对鸡抗绵羊红细胞抗体滴度的影响

4.4米糠多糖对IBDV病理损伤的影响

4.5米糠多糖对ND和AI疫苗免疫效果的影响

4.5.1米糠多糖对ND疫苗免疫效果的影响

4.5.2米糠多糖对AI疫苗免疫效果的影响

4.6本试验存在的问题与有待进一步研究的问题

5结论

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文

作者简历

致谢