苹果花芽形态分化及花孕育相关基因的克隆和表达研究

摘要

苹果（Malus domestica Borkh.）是世界上重要的果树资源之一，仅次于葡萄排第二位。苹果的花芽是混合芽，既有营养器官又有花的结构，通常着生在一年生短枝的顶端或枝条侧端，是在开花结果的前一年形成的。花芽分化是有花植物发育中最为关键的阶段，本试验以当前生产上的三个主栽品种新红星、嘎啦、富士为材料，研究了苹果花芽形态发育的动态过程以及与之相对应的花孕育相关基因AFL1、AFL2、MdTFL1在苹果上的表达模式，通过对RNA提取过程及RT-PCR体系的优化，建立了适于AFL1、AFL2、MdTFL1基因表达分析的技术体系，主要研究结果如下:
　　 1.保定地区新红星、嘎啦、富士进入花芽形态分化的时间分别是7月22日、7月22日和7月2日。分化过程一直持续到休眠。花芽分化高峰期分别出现在8月22日-9月22日、8月22日-9月22日和7月2日-9月12日。
　　 2苹果花芽形态分化的过程为（1）分生组织由扁平变为凸起（2）凸起的分生组织依次分化侧花苞片原基，侧花苞片原基内部分化侧花原基（3）分生组织中心分化中心花苞片原基和中心花原基（4）中心花分化出萼片原基（5）侧花原基依次分化萼片原基。
　　 3研制出了适合苹果单芽RNA提取的方法——改良SDS法。该方法流程短，适合大批量提取，所提RNA经RT-PCR检测能获得理想的目的条带，结果稳定可靠。
　　 4确定了适合苹果花芽孕育基因AFL1、AFL2、TFL1的 RT-PCR体系，AFL1、AFL2的最佳退火温度为59℃，TFL1的最佳退火温度为52℃，最佳Mg2+浓度为1.5mM，最佳dNTP浓度为225μM。
　　 5确定了苹果三个品种花芽孕育相关基因AFL1，AFL2，MdTFL1的表达模式，并对AFL1、MdTFL1部分序列进行了测定。

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1 引言

2 材料和方法

3结果与分析

4讨论

5结论

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