转CBF基因苹果株系地高辛标记Southern杂交分析及相关抗寒性状研究

摘要

本试验以嘎拉苹果（Malus domestica var.Gala）CBF(CRT/DRE binding factor)基因转化株系试管苗为试材，应用PCR、PCR-Southern、RT-PCR对其进行了检测，同时，经低温胁迫后，通过其细胞结构，离体叶片的相对电导率、游离脯氨酸含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶、过氧化物酶的活性对转基因株系的抗寒性进行了初步的评价。主要研究结果如下：
　　 1嘎拉苹果 CBF基因转化株系的PCR检测结果表明有阳性扩增条带，初步证明CBF基因已经整合到植株基因组DNA上。
　　 2以地高辛标记CBF基因片段作为探针，进行 PCR-Southern检测，结果表明CBF基因已经整合到植株基因组DNA上。
　　 3.对转基因株系进行RT-PCR检测，结果表明转入的外源CBF基因在转录水平表达。
　　 4.常温（25℃）和低温（2℃）处理转基因株系与对照，观察其叶片解剖结构，测定相关指标,2℃下的转基因株系栅/海比和栅栏组织紧密度最高，栅栏组织疏松度最低；25℃下的对照栅/海比和栅栏组织紧密度最低，栅栏组织疏松度最高。2℃下转基因株系的叶片有2层栅栏组织，而其它处理植株叶片只有1层栅栏组织。
　　 5.经过0，-2，-4，-6，-8，-10℃低温胁迫后，-8～-2℃时转基因株系的相对电导率均显著低于对照，随温度降低，相对电导率呈上升趋势。转基因株系的半致死温度平均为-6.20℃，而对照为-1.00℃。
　　 6.经过低温胁迫后，转基因株系的SOD活性均高于常温值，而对照均低于常温值，且在-8～0℃转基因株系SOD，POD活性均显著高于对照。
　　 7.经过低温胁迫后，随着温度的降低，转基因植株和对照的MDA含量均有所增加，均在-6℃时达到最高值，在-6～0℃下，转基因株系显著低于对照。转基因株系的MDA积累量少与未转基因株系。
　　 8.经过低温胁迫后，在-6～-2℃下转基因株系脯氨酸含量均显著高于对照。各株系脯氨酸含量相对于常温都有所增加，但转基因株系脯氨酸含量的积累显著高于对照。
　　 9.移栽至温室的转基因株系在入冬后温室内温度降低时落叶，而对照不落叶。

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1 引言

2 材料与方法

3 结果与分析

4 讨论

5 结论

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