光肩星天牛的致病昆虫病原线虫筛选、鉴定及其致病性研究

摘要

为寻求防治光肩星天牛有效的昆虫病原线虫品系,本研究从保定市内采集的120份土样中分离线虫,并将分离到的昆虫病原线虫进行初步的筛选,测定了11个品系昆虫病原线虫抗干燥能力及其对光肩星天牛的致病性,以期筛选出最佳线虫品系,为光肩星天牛防治及昆虫病原线虫制剂的开发和应用提供理论依据。结果表明:
　　 1.昆虫病原线虫的分离及干燥性测定:在保定市郊及周边市、县25个地点采集120份土样,诱集并成功繁殖5个昆虫病原线虫种群且均为异小杆线虫(Heterohabditidae)。不同昆虫病原线虫品系抗干燥能力不同,Steinernemacarpocapsae GA品系的存活率最高,达到75.1％；Heterorhabditis sp.ZH经干燥后存活率达50％以上,且复苏后线虫对大蜡螟致死率达100％；Heterorhabditis sp.CZ和XH-9品系存活率最低为O％。
　　 2.线虫品系的分类鉴定:利用形态学特征和ITS-rDNA分析对ZH种群进行了分类鉴定。通过对该线虫的形态特征进行观察,并对其侵染性幼虫、雄性成虫的重要参数进行测量,表明该线虫与嗜菌异小杆线虫的形态特征最为相近;同时ITS1-rDNA序列比对和系统发育学分析结果也显示该线虫与嗜菌异小杆线虫亲缘关系最近。确定该线虫为嗜菌异小杆线虫涿州品系。
　　 3.线虫侵染对血淋巴蛋白质含量的影响:采用考马斯亮蓝G-250法测定线虫侵染光肩星天牛幼虫体内血淋巴蛋白质含量的变化,结果显示处理过的天牛血淋巴内蛋白质含量在侵染初期变化不大,侵染后12 h～24 h,蛋白浓度呈明显上升趋势,至24 h达到最大值后开始不断下降最后显著低于对照组蛋白含量。对照组天牛幼虫在不同处理时间蛋白质含量并无显著变化,仅有小幅度波动。
　　 4.线虫侵染对保护酶活性的影响:光肩星天牛感染线虫初期超氧化物歧化酶(SOD),过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活力均迅速提高,在侵染后期SOD和POD活力有不同程度的下降,而CAT活力下降后又上升到较高的水平而后开始下降。SOD和POD活性变化趋势大体相似,均表现为先升高后降低,CAT活性变化趋势可归纳为升高-降低—升高-降低。
　　 5.线虫侵染对解毒酶活性的影响:光肩星天牛感染线虫后体内主要解毒酶活力均产生不同程度的影响。羧酸酯酶(CarE)和谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)活性变化大体表现为激活→抑制→激活→抑制；对乙酰胆碱酯酶(AchE)活力的影响大体表现为抑制→激活→抑制→激活→抑制。
　　 6.昆虫病原线虫对光肩星天牛致病力测定:11个品系昆虫病原线虫对光肩星天牛成虫和幼虫均有一定防治效果,解剖死亡的天牛成虫和幼虫,可见大量活跃的侵染期线虫在虫尸体内。Heterorhabditis Sp.ZH品系对光肩星天牛成虫和幼虫均有较高致病力,为最佳线虫品系。侵染10d后成虫累计校正死亡率为94.59％,LT50为4.10d；侵染幼虫4d后累计校正死亡率为100％,LT50为1.61d。不同浓度ZH品系线虫对光肩星天牛幼虫的致死能力不同,最优浓度为3500条／mL。

目录

文摘

英文文摘

1 引言

1.1 光肩星天牛概述

1.1.1 光肩星天牛的分布和危害

1.1.2 光肩星天牛发生规律和危害特点

1.2 光肩星天牛的生物防治

1.2.1 啄木鸟和花绒寄甲的利用

1.2.2 病原真菌和病原细菌等的应用

1.2.3 肿腿蜂等幼虫和蛹期寄生蜂的应用

1.2.4 昆虫病原线虫在光肩星天牛防治中的应用

1.2.5 影响昆虫病原线虫防效的因素

1.3 昆虫病原线虫的分类鉴定

1.3.1 昆虫病原线虫的分类地位

1.3.2 昆虫病原线虫的分类方法

1.4 昆虫病原线虫的致病机理

1.4.1 侵入途径

1.4.2 致病机理

1.5 本研究的目的和意义

2 昆虫病原线虫的筛选及干燥性测定

2.1 材料与方法

2.1.1 土样的采集

2.1.2 昆虫病原线虫的诱集

2.1.3 线虫收集盘

2.1.4 昆虫病原线虫的纯化和保存

2.1.5 昆虫病原线虫干燥性的测定

2.2 结果与分析

2.2.1 昆虫病原线虫的分离

2.2.2 经干燥处理后不同昆虫病原线虫品系的存活率

2.2.3 复苏线虫对大蜡螟的致死率

2.3 结论与讨论

3 昆虫病原线虫的分类鉴定

3.1 材料与方法

3.1.1 供试虫源

3.1.2 主要试剂及试剂盒使用说明

3.1.3 昆虫病原线虫的形态学鉴定

3.1.4 昆虫病原线虫的分子生物学鉴定

3.2 结果与分析

3.2.1 形态参数测量与描述

3.2.2 分子生物学特征

3.3 小结与讨论

4 昆虫病原线虫对光肩星天牛酶活性的影响

4.1 材料与方法

4.1.1 供试虫源

4.1.2 昆虫病原线虫对保护酶活性的影响

4.1.3 昆虫病原线虫对解毒酶活性的影响

4.2 结果与分析

4.2.1 光肩星天牛幼虫感染线虫后血淋巴蛋白浓度的变化

4.2.2 线虫侵染后对光肩星天牛幼虫体内主要保护酶活性的影响

4.2.3 线虫侵染对光肩星天牛幼虫体内主要解毒酶活性的影响

4.3 结论与讨论

5 昆虫病原线虫对光肩星天牛致病力测定

5.1 材料与方法

5.1.1 供试线虫

5.1.2 供试害虫

5.1.3 供试线虫的制备与计量

5.1.4 不同线虫品系对光肩星天牛成虫的致死能力

5.1.5 不同线虫品系对光肩星天牛幼虫的致死能力

5.1.6 不同侵染剂量的线虫对光肩星天牛幼虫的致病力

5.2 结果与分析

5.2.1 线虫的侵染过程及天牛的死亡症状观察

5.2.2 不同线虫品系对光肩星天牛成虫的致死能力

5.2.3 不同线虫品系对光肩星天牛幼虫的致死能力

5.2.4 不同侵染剂量线虫对光肩星天牛幼虫的致死能力

5.3 结论与讨论

6 结论和讨论

6.1 结论

6.2 讨论

6.3 本项研究创新点及展望

参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简历

致谢

附件