桃小食心虫高致病性昆虫病原线虫的分离及其致病机理研究

摘要

昆虫病原线虫(Entomopathogenetic nematodes, EPN)是一种农林害虫新型生防因子。为获得对桃小食心虫具有高致病性的昆虫病原线虫品系，本研究采用大蜡螟诱集法从河北省不同地区不同类型的300份土样中诱集和分离昆虫病原线虫，对分离出的8个品系昆虫病原线虫的抗干燥能力、繁殖能力及其对桃小食心虫的致病性等指标进行测定，以期筛选出最佳线虫品系，为桃小食心虫的防治及昆虫病原线虫制剂的开发和应用提供理论依据。结果表明:
　　1.在河北省内采集的300份土样中，成功诱集并繁殖了8个昆虫病原线虫品系，经形态学鉴定，分别为S.feitiae90、22、64、59 H.bacteriophora65、77、12、H.megidis67。
　　2.经干燥复苏处理，S.feitiae90品系的存活率最高，达到79.2％，S.feitiae64和Sfeitiae22经干燥后存活率达50％以上，且三种线虫复苏后对大蜡螟致死率均达100％。H.megidis67和H.bacteriophora12品系存活率最低为0％。不同线虫品系繁殖能力不同，其中斯式线虫品系中S.feitiae90的繁殖能力最强为0.85×106条/g，异小杆线虫品系中繁殖能力最强的是H.bacteriophora65为0.31×106条/g。
　　3.8个昆虫病原线虫品系中，，S.feitiae90品系为最佳线虫品系，侵染桃小食心虫幼虫72h后累计校正死亡率为91.6％，侵染夏茧10d后累计死亡率为63.6％;侵染冬茧10d后累计死亡率为60％。不同浓度S.feitiae90品系线虫对桃小食心虫老熟幼虫、夏茧、冬茧的致死能力不同，最优浓度为12000条/mL。
　　4.线虫侵染桃小食心虫幼虫后体内血淋巴蛋白质在侵染初期变化不大，侵染后4h～16h，蛋白浓度呈明显上升趋势，至16h达到最大值后开始不断下降最后显著低于对照组蛋白含量。对照组桃小食心虫幼虫在不同处理时间蛋白质含量并无明显变化，仅有小幅度波动。
　　5.桃小食心虫感染线虫初期超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活力均迅速提高，在侵染后期SOD、POD、CAT活力有不同程度的下降趋势，均表现为先升高后降低。
　　6.桃小食心虫感染线虫后体内主要解毒酶活力均产生不同程度的影响。谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)活性变化大体表现为激活→抑制→激活→抑制;对乙酰胆碱酯酶(AchE)活力的影响大体表现为抑制→激活→抑制→激活→抑制。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 桃小食心虫概述

1．1．1 桃小食心虫的分布和危害

1．1．2 桃小食心虫发生规律和危害特点

1．2 桃小食心虫的生物防治

1．2．1 寄生性天敌昆虫

1．2．2 病原微生物

1．2．3 性信息素防治

1．2．4 基因工程培育抗虫植株

1．2．5 昆虫病原线虫在桃小食心虫防治中的应用

1．2．6 影响昆虫病原线虫防效的因素

1．3 昆虫病原线虫的致病机理

1．3．1 侵入途径

1．3．2 致病机理

1．4 本研究的目的和意义

2 昆虫病原线虫的分离、鉴定

2．1 材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 土样的采集

2．1．3 昆虫病原线虫的诱集

2．1．4 线虫收集盘

2．1．5 昆虫病原线虫的纯化和保存

2．1．6 形态学鉴定

2．2 结果与分析

2．1 土样采集表

2．2 昆虫病原线虫的分离

2．3 昆虫病原线虫分类鉴

2．3 小结与讨论

3 昆虫病原线虫耐干燥能力与繁殖能力测定

3．1 材料与方法

3．1．1 供试虫源

3．1．2 昆虫病原线虫耐干燥能力的测定

3．1．3 虫病原线虫繁殖能力的测定

3．2 结果与分析

3．2．1 经干燥处理后不同昆虫病原线虫品系的存活率

3．2．2 复苏线虫对大蜡螟的致死率

3．2．3 昆虫病原线虫的繁殖能力

3．3 小结与讨论

4 昆虫病原线虫对桃小食心虫致病性测定

4．1 材料与方法

4．1．1 实验材料

4．1．2 试虫饲养

4．1．3 供试线虫的制备与计量

4．1．4 不同线虫品系对桃小食心虫老熟幼虫的致死能力

4．1．5 不同线虫品系对桃小食心虫夏茧的致死能力

4．1．6 不同线虫品系对桃小食心虫冬茧的致死能力

4．1．7 不同浓度线虫对桃小食心虫老熟幼虫的致死能力

4．1．8 不同浓度线虫对桃小食心虫夏茧的致死能力

4．1．9 不同浓度线虫对桃食心虫冬茧的致死能力

4．2 结果与分析

4．2．1 不同线虫品系对桃小食心虫老熟幼虫的致死能力

4．2．2 不同线虫品系对桃小食心虫夏茧的致死能力

4．2．3 不同线虫品系对桃小食心虫冬茧的致死能力

4．2．4 不同浓度线虫对桃小食心虫老熟幼虫的致病性的影响

4．2．5 不同浓度线虫对桃小食心虫夏茧的致病力

4．2．6 不同侵染剂量线虫对桃小食心虫冬茧的致病力

4．3 小结与讨论

5 昆虫病原线虫对桃小食心虫幼虫酶活性的影响

5．1 材料与方法

5．1．1 供试虫源

5．1．2 酶源制备

5．1．3 酶源蛋白质(Pro)含量的测定

5．1．4 保护酶活性测定

5．1．5 解毒酶活性测定

5．2 结果与分析

5．2．1 桃小食心虫幼虫感染线虫后血淋巴蛋白浓度的变化

5．2．2 线虫侵染后对桃小食心虫幼虫体内主要保护酶活性的影响

5．2．3 线虫侵染对桃小食心虫幼虫体内主要解毒酶活性的影响

5．3 小结与讨论

6 结论和讨论

6．1 结论

6．2 讨论

6．3 今后研究展望

参考文献

作者简历

致谢