产脂肪酶芽孢杆菌的分离及在鸡饲喂上的应用

摘要

本试验从富含油脂的土壤中筛选到一株产脂肪酶的芽孢杆菌菌株3EA1-1，经紫外诱变其酶活力达到50.5U/mL，命名为EA-300-A。对该菌株进行16SrDNA序列分析，并结合生理生化和菌落形态特征，最后鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。
　　对上述菌株进行体外模拟人工胃肠道的耐受性研究。研究发现:EA-300-A菌株对人工胃液、肠液和胆酸盐培养基的耐受性比较强，同时通过安全性实验，已经基本证明它对动物没有毒害作用。
　　上述研究表明，菌株Bacillus subtilis EA-300-A具有较高的酶活性，可以耐受人工胃肠液，并且生物安全，表明该菌株具有进一步大规模应用的潜力。为了便于后期菌剂生产，本试验对菌株进行了产芽孢条件优化，单因素试验和正交试验结果表明，EA-300-A菌株最适的产芽孢发酵条件为:2.0％玉米粉，1.0％黄豆饼粉，0.3％ CaCl2·2H2O，Na2HPO4·12H2O0.4％，NaH2 PO4·2H2O0.2％，初始pH8.0，种龄12h，接种量10％，装量50mL/250mL。
　　为了验证EA-300-A菌剂在饲喂上的效果，选取蛋公鸡为研究对象，检测菌剂在鸡增重、料重比、各种消化酶及微生物数量的影响。首先参照菌株芽孢条件优化结果生产菌剂。选择1日龄健康蛋公鸡150羽，随机分为3组，每组50羽。对照组在全价饲料的基础上添加1％大豆油，作为基础日粮，试验组1在基础日粮的基础上添加0.5％EA-300-A菌剂(5×108CFU/g)，试验组2在基础日粮的基础上添加1％ EA-300-A菌剂(5×108CFU/g)。饲养试验为期42天，预饲7d后进入试验期。饲喂期采用国标法对盲肠中大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌进行计数，测定十二指肠中脂肪酶活力的变化，并计算粪样中粗蛋白以及粗脂肪和粗灰分含量。饲喂试验结果显示:在饲粮中添加1％产酶菌剂鸡平均日增重提高23.06％，料重比降低19.60％;经过检测，鸡十二指肠内脂肪酶活性显著提高并且各营养物质在粪便中的残留明显降低，同时能够显著提高盲肠中乳酸菌和双歧杆菌含量以及降低大肠杆菌含量，达到了预期效果。
　　上述试验结果表明，饲粮中添加芽孢杆菌EA-300-A具有提高饲料转化率、改善鸡生长性能、调节肠道微生物群系并降低料重比等作用，为降低养殖业的生产成本、提高经济效益提供了良好的理论和实践基础。

目录

声明

摘要

第一章 引言

1．1 脂肪酶在饲料中的应用

1．1．1 饲料中添加脂肪酶的作用

1．1．2 饲料中添加脂肪酶的研究

1．2 市售脂肪酶的不足

1．3 微生物脂肪酶的种类及选育方法

1．3．1 产脂肪酶微生物的种类

1．3．2 产脂肪酶微生物菌株的筛选方法

1．3．3 直接饲喂产脂肪酶芽孢杆菌的优点

1．4 本试验的目的、意义及主要内容

1．4．1 本试验的目的意义

1．4．2 本试验的主要内容

第二章 产脂肪酶芽孢杆菌的分离筛选及鉴定

2．1 试验材料

2．1．1 样品

2．1．2 培养基

2．1．3 试剂

2．1．4 仪器

2．2 试验方法

2．2．1 菌株的初筛

2．2．2 产酶菌株的复筛

2．2．3 酶活力的测定

2．2．4 产酶菌株的鉴定

2．3 结果与分析

2．3．1 产脂肪酶菌株的初筛

2．3．2 产脂肪酶菌株的复筛

2．3．3 酶活测定结果

2．3．4 形态学测定

2．3．5 分子生物学测定

2．3．6 生理生化鉴定

2．4 讨论

第三章 产脂肪酶芽孢杆菌的紫外诱变

3．1 试验材料

3．1．1 供试菌株

3．1．2 培养基

3．1．3 主要仪器

3．2 试验方法

3．2．1 生长曲线的测定

3．2．2 菌株3EA1-1的紫外诱变

3．2．3 遗传稳定性测定

3．3 结果与分析

3．3．1 3EA1-1的对数生长曲线

3．3．2 紫外诱变初筛结果

3．3．3 紫外诱变复筛结果

3．3．4 菌株3EA1-1(300-A)遗传稳定性结果

3．4 讨论

第四章 诱变菌株EA-300-A体外特性评价

4．1 试验材料

4．1．1 菌种

4．1．2 培养基及试剂

4．1．3 仪器

4．2 试验方法

4．2．1 EA-300-A菌株对人工胃液的耐受性

4．2．2 EA-300-A菌株对人工肠液的耐受性

4．2．3 EA-300-A菌株对胆酸盐的耐受性

4．2．4 安全性实验

4．3 结果与分析

4．3．1 EA-300-A菌株对人工胃液的耐受性

4．3．2 EA-300-A菌株对人工肠液的耐受性

4．3．3 EA-300-A菌株对胆酸盐的耐受性

4．3．4 安全性实验

4．4 讨论

第五章 菌株EA-300-A产芽孢条件优化

5．1 试验材料

5．1．1 供试菌株

5．1．2 培养基

5．1．3 试剂

5．1．4 试验仪器

5．2 试验方法

5．2．1 种子培养

5．2．2 发酵培养

5．2．3 正交试验

5．2．4 芽孢产率测定

5．3 结果与分析

5．3．1 不同碳源对菌株EA-300-A发酵产芽孢的影响

5．3．2 氦源对菌株EA-300-A发酵产芽孢的影响

5．3．3 无机盐对菌株EA-300-A发酵产芽孢的影响

5．3．4 培养基成分正交试验

5．3．5 培养条件正交试验

5．4 讨论

第六章 菌剂EA-300-A对鸡饲喂效果试验

6．1 试验材料

6．1．1 试验用鸡

6．1．2 产酶芽孢杆菌制剂

6．1．3 试验饲粮

6．1．4 试验仪器

6．1．5 试验培养基

6．2 试验方法

6．2．1 试验设计与动物饲养管理

6．2．2 待测指标及测定方法

6．2．3 数据处理

6．3 结果与分析

6．3．1 产酶菌剂对鸡生产性能的影响

6．3．2 产酶菌剂对十二指肠内脂肪酶活力的影响

6．3．3 产酶菌剂对粪便中物质残留的影响

6．3．4 产酶菌剂对盲肠中菌群的影响

6．4 讨论

第七章 结论

参考文献

在读期间发表论文

作者简介

致谢