葡萄霜霉病拮抗菌和抗生素筛选及其防治效果的研究

摘要

葡萄霜霉病(Grape Downy Mildew)严重危害葡萄生产，是制约葡萄产业健康发展的重要因素。目前对葡萄霜霉病的防治，仍以化学防控为主要措施，在葡萄生长季需多次、大量施用化学药剂，因此存在着病菌产生抗药性、环境污染和农药残毒等诸多问题。因此，开展葡萄霜霉病的生物防治研究具有重要意义。本文旨在通过葡萄霜霉病拮抗菌及抗生素的筛选，以期为葡萄霜霉病的生物防治提供理论依据和技术支持。葡萄霜霉病菌为一种专性寄生菌，存在着病菌难以获得、发病时间较长等问题，为了保证后期筛选拮抗菌和抗生素的顺利进行，开展了对葡萄霜霉病菌孢子囊形成及离体萌发适宜条件的研究。研究结果如下:
　　1将接种葡萄霜霉病菌的离体葡萄叶片，设置不同光照、温度、湿度和养分的条件，观察其发病情况，发现在20℃黑暗、湿度为100％并加入2％乳糖的条件下，最适合葡萄霜霉病菌孢子囊的形成。采用水琼脂法固定孢子囊，研究葡萄霜霉病孢子囊离体萌发的条件，结果表明:葡萄霜霉病菌孢子囊悬浮液经4℃低温刺激0.5 h，用2％乳糖置于15℃黑暗条件下培养，孢子囊萌发率最高，萌发率为85.3％。
　　2在葡萄霜霉病离体叶片实验中，与龟裂链霉菌、CN300、6Y1混合的葡萄霜霉病孢子囊悬浮液，接于健康叶片5d后发病率分别为15％、10.83％、0％，较对照在α=0.05水平下有显著差异。将发病率较低的CN300、6Y1两种菌株采用摇床发酵的方法，对培养液不同浓度和不同成分进行葡萄霜霉病菌抑制效果的进一步研究，结果表明，真菌6Y1的菌丝对葡萄霜霉病的防治效果显著，并且随菌丝浓度的增加，防治效果越明显。通过形态学鉴定和18SrDNA ITS序列分析，确定6Y1为芸苔链格孢，为了获得更多对霜霉病菌有抑制作用的6Y1菌丝，通过单因素及L9(33)正交试验，研究6Y1发酵过程中培养基、转速、接种量、装液量对6Y1真菌菌丝产量的影响，确定转速为200 r/min，接菌量为2块、装瓶量为175 mL的优化组合下，菌丝的产量最大，可达到0.907 g/100 mL。
　　3用不同抗生素对健康葡萄叶片处理后，接种葡萄霜霉病菌孢子囊，测定其对葡萄霜霉病的预防效果，发现武夷菌素300倍、春雷霉素200倍、多抗霉素1000倍3种抗生素对葡萄霜霉病的预防效果分别为81.67％、55％、66.67％，井冈霉素无明显抑菌效果;在室内对已发病的葡萄叶片（清水洗掉孢子囊），喷洒4种抗生素，3d后观察治疗效果，结果表明春雷霉素对葡萄霜霉病菌有治疗作用。将脂溶性渗透剂与春雷霉素混合后，通过离体叶片治疗和田间治疗试验，结果表明脂溶性渗透剂对春雷霉素有一定的增效作用。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 葡萄霜霉病概述

1．2 葡萄霜霉病的防治研究

1．2．1 选用抗病品种

1．2．2 加强田间管理

1．2．3 化学防治

1．2．4 生物防治

1．3 链格孢用于植物病害生物防治的研究

1．4 抗真菌农用抗生素的研究

1．5 研究目的和意义

2 试验材料

2．1 供试葡萄叶片及葡萄品种

2．2 供试菌株

2．3 培养基

2．4 供试药剂

3 试验方法

3．1 葡萄霜霉病菌孢子囊形成及离体萌发的适宜条件研究

3．1．1 孢子囊悬浮液制备

3．1．2 孢子囊接种方法

3．1．3 不同条件对孢子囊形成的影响

3．1．4 孢子囊离体荫发适宜条件研究

3．2 葡萄霜霉病菌拮抗菌株筛选及防治效果研究

3．2．1 葡萄内生菌的分离

3．2．2 供试菌株的培养和菌悬液配制

3．2．3 供试菌株对葡萄霜霉病防治效果室内离体叶片试验

3．2．4 6Y1、CN300菌株发酵液对葡萄霜霉病菌的拮抗作用

3．2．5 真菌6Y1的不同成分对葡萄霜霉病菌的拮抗作用

3．2．6 真菌6Y1鉴定

3．2．7 促进6Y1真菌菌丝生长发酵条件的优化

3．3 不同抗生素对葡萄霜霉病的防治研究

3．3．1 供试抗生素药液的配制

3．3．2 不同抗生素对葡萄霜霉病的预防试验

3．3．3 不同抗生素对葡萄霜霉病的治疗试验

3．3．4 脂溶性渗透剂对春雷霉素的增效作用

4 结果与分析

4．1 葡萄霜霉病菌孢子囊形成及离体萌发的适宜条件研究

4．1．1 不同光照条件对孢子囊形成率的影响

4．1．2 不同温度对孢子囊形成率的影响

4．1．3 不同湿度对孢子囊形成率的影响

4．1．4 不同养分对孢子囊形成率的影响

4．1．5 孢子囊离体萌发条件

4．2 葡萄霜霉病菌拮抗菌株筛选及防治效果研究

4．2．1 供试菌株对葡萄霜霉病的防治效果

4．2．2 6Y1、CN300培养液对葡萄霜霉病菌的防治效果

4．2．3 不同成分6Y1培养液对葡萄霜霉病菌的拮抗作用

4．2．4 真菌6Y1鉴定

4．2．5 促进6Y1真菌菌丝生长发酵条件的优化

4．3 不同抗生素对葡萄霜霉病的防治研究

4．3．1 不同抗生素对葡萄霜霉病的预防效果

4．3．2 不同抗生素对葡萄霜霉病的治疗效果

4．3．3 脂溶性渗透剂对春雷霉素的增效作用

5 结论与讨论

5．1 葡萄霜霉病菌孢子囊形成及离体萌发的适宜条件研究

5．2 葡萄霜霉病菌拮抗菌株筛选及防治效果研究

5．3 不同抗生素对葡萄霜霉病的防治研究

参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简介

致谢