生绒期和品种对山羊绒毛生长相关激素分泌及基因表达的影响

摘要

羊绒是珍贵的天然纤维资源，因穿着的舒适性、保暖性及良好的色泽度倍受消费者喜爱。然而羊绒产量有限，羊绒制品业成了当然的高档奢饰品，因而提高产绒性能，挖掘绒山羊产绒的遗传潜力是绒山羊生产中的研究热点。绒山羊羊绒的生长受品种及相关激素的调控，本文通过研究燕山绒山羊和承德黑山羊不同生绒期（旺盛期和退行期）相关激素的分泌与基因表达，探讨生绒期和品种与产绒性能的关系，以期为提高绒山羊产绒性能奠定理论基础。
　　本研究以生绒旺盛期及退行期的燕山绒山羊和承德黑山羊为试验对象采集血清，利用放射性免疫法对其血清中的褪黑素(melatonin，MT)、催乳素(prolactin，PRL)、生长激素（growth hormone，GH）和甲状腺素(thyroid hormone，T3)进行测定分析。不同绒毛生长时期不同品种间浓度不同，燕山绒山羊和承德绒山羊褪黑素的浓度生绒旺盛期均显著高于退行期（P＜0.01），而催乳素的浓度则在绒毛生长的旺盛期均极显著低于退行期(P＜0.01)，生绒旺盛期燕山绒山羊褪黑素和催乳素的浓度均显著低于承德黑山羊(P＜0.05)，生长激素的浓度在燕山绒山羊不同时期表达不显著(P＞0.05)，而承德黑山羊差异极显著(P＜0.01)，品种间的生长激素的浓度则只在生绒旺盛期差异显著(P＜0.05），燕山绒山羊和承德黑山羊的甲状腺素在不同品种及不同绒毛生长时期各组间差异均不显著(P＞0.05)。
　　本研究还采集了皮肤组织，利用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)分析了激素受体基因mRNA表达水平的差异。利用绝对定量标准曲线拷贝数对不同时期不同品种的绒山羊的Retinoic acid receptor related orphan receptor(RORa)、Short prolactinreceptor(S-PRLR)、Epidermal growth factor receptor(EGFR)、Insulin like growth factor1(IGF-Ⅰ)mRNA表达量进行分析比较。这些受体基因mRNA在品种间及不同绒毛生长时期的表达均不相同，燕山绒山羊和承德黑山羊RORa mRNA的表达量旺盛期均显著低于退行期(P＜0.05)，品种间比较只在退行期差异显著(P＞0.05);燕山绒山羊S-PRLR mRNA表达量旺盛期显著高于退行期(P＜0.05)，承德黑山羊则差异不显著(P＞0.05)，品种间在两时期差异显著(P＜0.05);燕山绒山羊和承德黑山羊EGFR mRNA表达量旺盛期显著高于退行期(P＜0.01)，品种间在绒毛生长的两个时期差异不显著(P＞0.05);燕山绒山羊IGF-Ⅰ mRNA表达量旺盛期显著高于退行期(P＜0.01)，承德黑山羊差异不显著(P＞0.05)，品种间则只在生绒旺盛期时差异显著(P＜0.01)。
　　为了进一步在蛋白水平对受体基因(RORa、S-PRLR、EGFR、IGF-Ⅰ)进行分析，本研究利用蛋白免疫印迹法对两品种绒山羊在旺盛期及退行期皮肤组织的蛋白进行验证，这些蛋白在绒山羊皮肤中均有表达，燕山绒山羊和承德黑山羊生绒旺盛期及退行期RORa和PRLR蛋白表达量显著低于退行期（P＜0.05），在绒毛生长的两个不同时期燕山绒山羊RORa和PRLR蛋白表达量显著高于承德黑山羊(P＜0.05）。燕山绒山羊、承德黑山羊EGFR生绒旺盛期的蛋白表达量分别显著高于退行期（P＜0.05）;在两个不同生绒时期EGFR蛋白表达量燕山绒山羊与承德黑山羊差异不显著(P＞0.05)。燕山绒山羊IGF-Ⅰ蛋白表达量在生绒旺盛期显著高于退行期(P＜0.05），而承德黑山羊差异不显著(P＞0.05);两品种比较，在生绒旺盛期IGF-Ⅰ蛋白表达量燕山绒山羊显著高于承德黑山羊(P＜0.05)，但在退行期时差异不显著(P＞0.05）。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 绒山羊分布区域

1．2 绒山羊毛囊结构与周期性发育规律

1．3 影响绒山羊绒毛生长的因素

1．4 研究意义

2 材料与方法

2．1 主要试验材料及设备

2．1．1 样本的采集

2．1．2 主要仪器与试剂药品

2．2 试验方法与步骤

2．2．1 放射性免疫

2．2．2 实时荧光定量

2．2．3 蛋白免疫印迹(Western blotting)试验

2．3 数据统计分析

3 结果与分析

3．1 绒毛生长期和品种因素对绒山羊褪黑素、催乳素、生长激素、甲状腺素分泌的影响

3．2 绒毛生长期和品种因素对绒山羊RORa、S-PRLR、EGFR、IGF-Ⅰ基因mRNA表达的影响

3．2．1 皮肤总RNA提取结果

3．2．2 质粒构建标准品结果

3．2．3 RT-qPCR结果

3．2．4 mRNA表达量比较分析

3．3 绒毛生长期和品种因素对RORa，PRLR，EGFR，IGF-Ⅰ蛋白表达的影响

3．3．1 绒山羊皮肤组织总蛋白的提取

3．3．2 蛋白浓度的测定

3．3．3 印迹膜化学发光检测结果

3．3．4 蛋白表达量分析

4 讨论

5 结论

参考文献

硕士期间发表的学术论文

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