枸杞低聚糖对双歧杆菌增殖效应的研究

摘要

枸杞（lycium barbarum）营养成分丰富，糖类作为枸杞中含量最为丰富的营养物质，对它的利用却更多的停留在直接食用阶段，产品种类单一。本实验验证枸杞低聚糖对双歧杆菌的促进作用，目前关于低聚糖开展的研究有:金丝小枣低聚糖、牛蒡低聚糖、大豆低聚糖、大蒜低聚糖对双歧杆菌促进作用，尽管采用植物源性糖促进益生菌研究较多，但关于枸杞低聚糖对双歧杆菌促进作用暂无报道，主要研究结果如下:
　　1、以枸杞为原料，经过热水浸提、醇沉、酶解、纯化后所得到的枸杞低聚糖通过气相色谱法进行分析，结果可得:枸杞低聚糖中含有的6种单糖，其中阿拉伯糖、半乳糖含量较高，分别为46.21％、35.21％，枸杞低聚糖通过酶解枸杞多糖的方法获得枸杞低聚糖。与文献结果含量少有少量差距，单糖种类一致。
　　2、以枸杞果为原料，通过氨基酸自动分析仪，对枸杞中氨基酸进行测定，共检出16种氨基酸，总氨基酸含量为11g/100g，其中必需氨基酸有7种，人体必需的8种氨基酸中仅有色氨酸未检出。
　　3、以枸杞低聚糖及葡萄糖为碳源，通过对活菌数测定，研究不同浓度枸杞低聚糖对双歧杆菌增殖的影响，结果发现:随着浓度增加活菌数也随之增加，当枸杞低聚糖完全代替葡萄糖时活菌数最高，当糖浓度继续增加时，由于渗透压影响，活菌数开始降低，从而得到最适浓度为20g/100m1。
　　4、以不同种类糖为碳源，通过对活菌数测定，研究双歧杆菌碳源代谢情况进行探究:分别以20种不同的糖作为双歧杆菌代谢过程中唯一碳源进行培养，发现双歧杆菌可以在其中14种糖中生长，其对碳源利用较乳杆菌更为丰富。
　　5、以不同种类糖为碳源，通过对活菌数及吸光值测定，研究枸杞低聚糖对双歧杆菌的体外增殖作用，结果表明:通过对枸杞低聚糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖、木糖中生长的双歧杆菌进行生长曲线绘制，在枸杞低聚糖中生长的双歧杆菌有更长的对数期，增殖速率更快，反应结束后菌体浓度更高，并测定增殖过程中溶液的pH变化，发现枸杞低聚糖中生长的双歧杆菌处于对数期时，短链脂肪酸积累更多，pH下降更快，说明枸杞低聚糖提高了双歧杆菌发酵力
　　6、以不同种类糖为碳源，对乳糖酶活力进行测定，每6h进行一次乳糖酶活力测定，结果可知:实验中乳糖酶活力最高时为18h，在18h时在枸杞低聚糖中生长的双歧杆菌具有最高的乳糖酶活力。
　　7、以枸杞低聚糖及葡萄糖为碳源，对双歧杆菌耐受性测定。模拟胃液pH3.0情况下，枸杞低聚糖对提高双歧杆菌肠道耐受性方面效果明显;在模拟肠液环境下，3h内枸杞低聚糖对双歧杆菌胰蛋白酶耐受性提高显著;在3mg/mL的牛胆盐浓度下，由于双歧杆菌有较强的耐受性，枸杞低聚糖在提高牛胆盐耐受性效果不明显。
　　本实验将以枸杞为原料制备低聚糖，探究枸杞低聚糖对双歧杆菌增殖的促进作用。丰富枸杞功能学研究，拓展枸杞产业应用。

目录

声明

摘要

1．1 目的意义

1．2 国内外研究进展

1．2．1 枸杞的化学成分

1．2．2 枸杞的生物活性

1．2．3 双歧杆菌

1．2．4 低聚糖

1．3 本研究主要内容

1．3．1 主要内容

1．3．2 糖类分离方法

1．3．3 结构鉴定

1．3．4 β-半乳糖苷酶活力

2 枸杞低聚糖制备及氨基酸含量测定

2．1 材料与方法

2．1．1 试验材料

2．1．2 试验试剂

2．1．3 试验仪器

2．2 试验方法

2．2．1 枸杞低聚糖的制备

2．2．2 枸杞低聚糖组成的气相色谱分析

2．2．3 枸杞干果中氨基酸含量测定

2．3 结果分析

2．3．1 葡萄糖标准曲线的绘制

2．3．2 标准单糖分析

2．3．3 氨基酸含量

2．4 小结

3 枸杞低聚糖对双歧杆菌生长促进作用

3．1 材料与方法

3．1．1 试验用菌株

3．1．2 主要试剂

3．1．3 主要设备

3．1．4 溶液及培养基配置

3．2 试验方法

3．2．1 双歧杆菌的复苏、活化

3．2．2 菌悬液制备

3．2．3 吸光值检测

3．2．4 菌落总数的测定

3．2．5 枸杞低聚糖对双歧杆菌的生长影响

3．2．7 乳糖酶活力的测定

3．2．8 数据分析

3．3 结果分析

3．3．1 不同浓度低聚糖对双歧杆菌生长的影响

3．3．2 发酵液OD(600)曲线测定

3．3．3 双歧杆菌生长曲线的测定

3．3．4 发酵液中pH值变化曲线

3．3．5 不同碳源对乳糖酶活力的影响

3．4 小结

4 枸杞低聚糖在模拟胃肠环境下对双歧杆菌生长的效果

4．1 材料与方法

4．1．1 主要试剂

4．1．2 仪器设备

4．1．3 主要溶液配置

4．2 试验方法

4．2．1 双歧杆菌计数方法

4．2．2 人工胃液耐受性

4．2．3 人工肠液耐受性

4．2．4 胆盐耐受性

4．2．5 数据分析

4．3 结果分析

4．3．1 人工胃液耐受性

4．3．2 人工肠液耐受性

4．3．3 胆盐耐受性

4．4 小结

5．1 主要结论

5．2 展望

参考文献

作者简历

致谢