氨溴索对哮喘大鼠肺组织激活蛋白-1和γ-谷胺酰半胱氨酸合成酶表达的影响

摘要

背景：经典理论认为，哮喘是以嗜酸粒细胞(Eosinophil，EOS)浸润为主的气道炎症，但近年来很多研究发现，氧化/抗氧化失衡在哮喘的发生发展中也起着重要作用。氨溴索(ambroxol，AMB)是一种临床常用祛痰药，近年来研究发现，其具有一定抗氧化作用，在哮喘治疗中具有一定的应用价值。
　　 目的：通过观察氨溴索对哮喘大鼠肺组织病理的改变以及对哮喘大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液中激活蛋白-1(activator protein-1，AP-1)和γ-谷胺酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase，γ-GCS)蛋白的影响，初步探讨氨溴索对哮喘大鼠气道氧化/抗氧化系统的作用及其可能的作用机制。
　　 方法：将30只雄性Sprauge-Dawley(SD)大鼠随机分为3组：空白对照组、哮喘模型组和氨溴索处理组。哮喘模型组和氨溴索处理组分别于第1d和第8d向大鼠腹腔内注射抗原液1ml，(含有卵清蛋白(ovalbumin，OVA)100mg，氢氧化铝100mg)致敏。第15天开始雾化吸入1％OVA(w/v)激发气道反应，每次20分钟，每日1次，共7天。空白对照组则于第1、8天腹腔内注射生理盐水1ml，第15天开始雾化吸入生理盐水，每次20分钟，每日1次，共7天。
　　 氨溴索处理组致敏同时给予腹腔注射氨溴索50mg.kg-1.d-1，空白对照组和哮喘模型组则同时给予等量生理盐水腹腔注射，共21天。各组动物于最后一次雾化吸入后24小时行支气管肺泡灌洗，收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)。采用HE染色观察肺组织病理的改变，免疫细胞化学染色法检测支气管肺泡灌洗液中AP-1(c-Jun和c-Fos亚单位)及γ-GCS的表达水平以及免疫组织化学法观察AP-1(c-Jun和c-Fos亚单位)及γ-GCS在肺组织中的表达。
　　 结果：(1)激发过程中哮喘模型组大鼠出现呼吸窘迫症状(呼吸急促、青紫等)，氨溴索处理组大鼠激发的症状与哮喘模型组相比有明显减轻，空白对照组大鼠未见呼吸窘迫等症状。
　　 (2)各组大鼠肺组织病理变化：空白对照组显示大鼠肺组织可见肺泡大小均一且肺泡壁薄，支气管上皮完整，周围几乎无炎性细胞浸润及其分泌物。哮喘模型组显示支气管粘膜上皮水肿伴有局部的脱落，基底膜的增厚，粘液腺增多，管壁的各层均可见嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和单核细胞的浸润。氨溴索处理组显示病变范围、程度均较模型组明显减轻；
　　 (3)肺组织和支气管肺泡灌洗液AP-1(c-Jun、c-Fos亚单位)蛋白表达：哮喘模型组肺组织及支气管肺泡灌洗液中c-Jun蛋白和c-Fos蛋白的表达水平与空白对照组比较明显升高(P<0.01)；氨溴索处理组c-Jun蛋白和c-Fos蛋白的表达水平与哮喘模型组比较明显降低(P<0.01)，但仍高于空白对照组(P<0.01)；
　　 (4)肺组织和支气管肺泡灌洗液γ-GCS蛋白表达：哮喘模型组肺组织及支气管肺泡灌洗液γ-GCS蛋白的表达水平与空白对照组比较明显升高(P<0.01)；氨溴索处理组肺组织及支气管肺泡灌洗液中γ-GCS蛋白的表达水平与哮喘模型组比较明显降低(P<0.01)，但仍高于空白对照组(P<0.01)。
　　 结论：(1)氨溴索发挥抗氧化作用，其机制可能是通过降低AP-1(c-Jun、c-Fos亚单位)和γ-GCS蛋白的表达水平有关。
　　 (2)氨溴索通过其抗氧化作用，减轻支气管肺组织的损伤，对哮喘大鼠模型具有一定的气道保护作用。