抑郁症大鼠学习记忆缺损以及海马GAP-43表达的变化

摘要

目的:建立慢性抑郁症Sprague-Dawley大鼠模型，通过避暗试验观察抑郁症模型大鼠不同时间段学习记忆功能，检测神经生长相关蛋白-43(neuronal growthassociated protein，GAP-43)在慢性抑郁症模型大鼠海马组织中表达，探讨GAP-43与学习记忆之间的关系。
　　方法:
　　1.健康雄性SD大鼠96只，随机分为慢性应激抑郁症组、正常对照组，抑郁症组分21d，42d，60d，3个亚组，每组匹配相对数量的正常大鼠做对照。通过认知功能试验观察大鼠学习记忆改变，通过认知功能试验观测指标，研究大鼠各个时间段学习记忆的变化。
　　2.实验组大鼠均采用单笼饲养，饲养环境相同，避暗试验检测后，无痛处死抑郁症模型组及空白对照组大鼠8只，剩余大鼠进入下一亚组。慢性郁症模型组每亚组于21d，42d，60d时行避暗实验后无痛处死大鼠，模型组每亚组取大鼠24只，空白对照组取8只;检测GAP-43mRNA及蛋白表达。每模型实验组大鼠16只用乙醚麻醉断头，无RNA酶试验台内快速取出海马，并液氮冷藏后迅速移至-80℃冰箱备用，另8只经吸入乙醚后用4％多聚甲醛灌注、蔗糖梯度脱水后，应用OTC(Sakura，USA)包埋固定，-80℃冰箱保存以备组织切片用。应用免疫组化、RT-PCR和westernblot等技术方法研究慢性应激抑郁症模型大鼠海马GAP-43mRNA及相关蛋白的表达并探讨与学习及空间记忆的关系。
　　结果:
　　1.慢性应激抑郁症大鼠制作成功后大鼠有抑郁症表现，参照国际标准，确定大鼠抑郁症模型试验建立，模型制作成功率为94.9％。模型制作成功后，大鼠需不断进行刺激，以防大鼠可能有自愈可能，不再有抑郁症表现，使实验结果出现偏差。空白组避暗试验结果潜伏期(LT)为（56.00±2.71s）、穿梭次数(EN)为（3.29±1.14次），抑郁症模型组:模型成功后21d(即模型当天至成功第21d)避暗试验结果的LT为(47.81±3.31s)、EN为(2.76±0.92次);慢性抑郁症模型组42 d避暗试验结果为LT（38.51±1.28s）、EN为（5.15±1.21次）;慢性抑郁症模型组60 d避暗试验结果(46.73±2.61s)、EN为(2.35±1.01次)，慢性应激性抑郁症大鼠模型组与对照组比学习记忆能力明显下降(P＜0.05)，实验大鼠学习记忆功能有所改变。
　　2.分子生物学检测
　　(1)免疫组织化学结果:结果显示GAP-43在海马细胞中有表达，属于胞浆蛋白，显微镜下观测呈橙黄色。慢性应激抑郁症模型组与空白对照组阳性细胞百分率表达有明显差异性，统计学显示P＜0.05，有统计意义，对照组高于模型组，抑郁症模型组间比较，阳性细胞百分率42d明显低于21d组、60d组，42d组最低（P＜0.05）。
　　(2)RT-PCR反转录聚合酶链式反应试验结果:紫光灯下观察，结果显示GAP-43在海马细胞中有表达，在marker的对照下目的条带清晰可见，测定各条带OD值，与GADPH管家基因比值进行校对，慢性应激抑郁症模型组与空白对照组有明显差异，统计学计算结果，P＜0.05，为有统计意义，对照组高于模型组。模型组内比较，光密度校对值点燃21d、60d组时明显高于42d组，42d组最低(P＜0.05)。
　　(3)Western blot结果:免疫发光曝光后，结果显示GAP-43在海马细胞中有表达，在marker的对照下目的条带清晰可见，测定各条带OD值，与GADPH管家基因比值进行校对，统计学计算结果，P＜0.05，为有统计意义，对照组高于模型组。模型组内比较，光密度校对值点燃21d、60d组时明显高于42d组，42d组最低，P＜0.05，有统计意义。
　　结论:
　　1.慢性应激抑郁症大鼠学习记忆等认知功能有一定缺损，而且学习记忆能力的降低随时间推移不断变化，初期和末期明显下降，中期下降更为明显。
　　2.GAP-43与慢性应激抑郁症大鼠的学习记忆功能有关，其表达呈明显下降趋势，且以中期下降尤为明显，提示:GAP-43下降程度与学习记忆下降的程度相关。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 慢性抑郁症大鼠模型建立及学习记忆的研究

1．慢性应激抑郁症大鼠模型的制作材料与方法

1．1 实验动物

1．2 实验主要使用试剂

1．3 慢性应激抑郁症大鼠模型的建立

1．4 统计学处理及分析

2．结果

第二部分 慢性抑郁症模型大鼠GAP-43的表达及其学习记忆关系

1．材料与方法

1．1 标本收集

1．2 灌注方法

1．3 实验材料

1．4 实验步骤

1．5 分子生物学实验检测

2．结果

2．1 免疫组织化学结果

2．2 RT-PCR反转录聚合酶链式反应试验结果

2．3 western blot结果

3．讨论

4．小结

参考文献

综述 神经生长相关蛋白的突触记忆

致谢

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