重组人脑利钠肽表达及生物学活性测定

摘要

脑利钠肽（Brain natriuretic peptide，BNP，又称B型钠尿肽）是于1988年由日本学者Sudoh等首次从猪脑中分离而得来的，但实际上脑利钠肽的主要来源是心室、尤其是左心室为主。脑利钠肽与A型利钠肽(Atrial natriuretic peptide，ANP)、C型利钠肽(C-type natriuretic peptide，CNP)同属于利钠肽（Natriuretic peptide，NP）家族。利钠肽家族是维持血压稳定及水、盐代谢平衡的关键调节因子，心力衰竭(Heartfailure，HF)时由于容量超载和心室壁张力增加，利钠肽家族就被高度激活。利钠肽家族具有调节血压，利尿，扩张心外膜以及冠状动脉，抑制血管平滑肌增殖，抑制血管组织增生等作用。所以利钠肽家族在检测和治疗心血管系统疾病方面有着巨大的前景。
　　脑利钠肽是一种多肽类神经激素，由32个氨基酸残基构成，其中氨基端第7个和第23个残基由二硫键形成环状结构，形成脑利钠肽的功能域。与其天然受体结合后，可激活其胞内区的鸟苷酸环化酶活性，催化三磷酸鸟苷(Guanosmetriphosphate，GTP)转化为环磷酸鸟苷(Cyclic guanosine monophosphate，cGMP)。所以通过检测cGMP含量可以测定重组人脑利钠肽的生物学活性。
　　通过分子克隆的方法，对人脑利钠肽的基因序列进行优化合成，构建表达载体，对其进行测序鉴定，并转化到大肠埃希菌BL21原核表达系统中，筛选阳性单克隆菌落，得到重组人脑利钠肽的工程菌，并进行脑利钠肽大规模诱导表达，然后纯化出重组人脑利钠肽蛋白，最后建立酶联免疫吸附剂测定(Enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)活性的方法，用于脑利钠肽的生物学活性测定。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 脑利钠肽的分子结构及作用机制

1．1．1 脑利钠肽的分子结构

1．1．2 脑利钠肽的组织特异性表达

1．1．3 脑利钠肽的受体

1．2 脑利钠肽的生理功能

1．3 脑利钠肽的应用

1．3．1 脑利钠肽在心力衰竭的诊断中的应用

1．3．2 脑利钠肽在预后中的应用

1．3．3 脑利钠肽在心力衰竭的治疗中的应用

1．3．6 脑利钠肽在左心室功能障碍疗效检测中的应用

1．4 重组蛋白的原核表达系统

1．4．1 原核表达系统

1．4．2 基因设计对重组蛋白表达的影响

1．4．3 亲和标签对融合蛋白的影响

1．5 酶联免疫吸附剂测定(ELISA)

1．5．1 竞争法酶联免疫吸附测定

1．6 课题的研究背景、内容及意义

1．6．1 课题的研究背景

1．6．2 课题的研究意义

1．6．3 课题的主要研究内容

第2章 重组人脑利钠肽高效可溶性表达系统的构建

2．1 材料与方法

2．1．1 实验设备及耗材

2．1．2 实验药品与试剂

2．1．3 实验药品配制

2．1．4 试验方法

2．2 结果与讨论

2．2．1 载体构建

2．2．2 工程菌筛选

2．3 本章小结

第3章 重组人脑利钠肽蛋白的纯化

3．1 材料与方法

3．1．1 主要试剂耗材

3．1．2 仪器与设备

3．1．3 试剂配制

3．1．4 实验方法

3．2 结果与讨论

3．2．1 目的蛋白纯化

3．3 本章小结

第4章 重组人脑利钠肽蛋白的理化性质及生物学活性测定

4．1 材料与方法

4．1．1 主要试剂

4．1．2 主要材料

4．1．3 仪器与设备

4．1．4 试验方法

4．2 结果与讨论

4．2．2 理化性质

4．3 本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间所发表的论文

致谢

个人简历