MiR-138、miR-145对人结肠癌Caco-2细胞生物学行为的影响

摘要

结肠癌在恶性肿瘤发病率中居第三位，在肿瘤相关死亡原因中居第四位。尽管近年来手术、化疗、放疗和靶向治疗等治疗方法有了较大进步，但结肠癌的高转移率和高病死率仍是重大的难题，因此进一步阐明结肠癌发生发展的分子机制，成为结肠癌研究的热点。微小核糖核酸（microRNA，miRNA)是一类大小长约20~25个核苷酸的单链非编码RNA，通过与靶mRNA的3'-UTR区不完全或完全互补结合的方式调控基因表达，影响细胞生长、增殖、分化和凋亡等多种生物学过程。 目的： 探讨miRNA（miR-138、miR-145）对人结肠癌Caco-2细胞迁移、增殖及细胞周期等生物学行为的影响及对增殖相关蛋白c-myc表达水平的影响。以期为后续进一步研究miR-138、miR-145在结肠癌中的生物学功能和具体调控机制，从而为结肠癌早期诊断及治疗提供实验依据。 方法： 构建miR-138、miR-145及阴性对照（Negative control，NC）质粒，并培养结肠癌Caco-2细胞，将实验分为3组进行：miR-138组、miR-145组及NC组。采用脂质体转染法将miR-138、miR-145及NC质粒转入Caco-2细胞，并于不同时间点在倒置荧光显微镜下观察细胞生长状态及转染效率。采用细胞划痕实验检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对细胞迁移的影响；以噻唑蓝（MTT）增殖试验检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对细胞增殖的影响；用流式细胞术检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对细胞周期的影响。分别提取miR-138、miR-145转染组及NC组细胞总蛋白，用免疫印迹法检测miR-138、miR-145转染结肠癌Caco-2细胞后对增殖相关蛋白c-myc表达水平的影响。 结果： Caco-2细胞转染miR-138、miR-145及NC质粒后，miR-138组、miR-145组细胞划痕愈合速度较NC组细胞划痕愈合速度较慢，差异有统计学意义（p＜0.05）。MiR-138组、miR-145组细胞增殖活力与NC组相比明显受到抑制，差异有统计学意义（p＜0.05）。同时miR-138组、miR-145组细胞与NC组细胞相比，G1期百分比增高，差异有统计学意义（p＜0.05），S期、G2期百分比则无明显变化（p＞0.05）。免疫印迹法检测发现miR-138组、miR-145组的Caco-2细胞中c-myc蛋白表达水平较NC组降低。 结论： MiR-138、miR-145在结肠癌Caco-2细胞中过表达，可以抑制细胞的迁移和增殖能力，并可使细胞发生G1期阻滞，减慢细胞周期进程。同时miR-138、miR-145可降低增殖相关蛋白c-myc的表达水平，从而抑制细胞的增殖。

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