假丝酵母Candida sp.99-125脂肪酶的固定化研究

摘要

本文对假丝酵母Candida sp.99-125 脂肪酶的固定化进行了较系统的研究。在采用树脂吸附固定化Candida sp.99-125 脂肪酶的基础上，分别经交联和包埋处理。考察新型生物交联剂——京尼平在固定化酶中的应用，比较京尼平与戊二醛对固定化酶的影响；通过氧化硅涂层法与离子液体涂覆法对吸附固定化酶进行包埋，并考察其稳定性。采用CLEAs 技术与仿生硅化相结合制备固定化酶并考察其性能。 首先，确定了树脂NKA–9为固定化酶的最优载体，通过单因素实验，得到最佳固定化条件为：缓冲液离子强度0.1M，pH 7.5，粗酶酶浓30 mg/mL（载体质量为200 mg），反应温30 ℃，摇床转速150 rpm 及吸附时间4 h，此条件下制备的固定化酶的水解活力达145.83 U/g，吸附率达60.04%，酶活回收率达80.36%。 其次，采用京尼平对其交联，考察影响交联的因素，得到最优交联反应条件：温度20℃，交联pH 6.0，时间6 h，京尼平质量浓度为0.25%（S–8）和0.5%（NKA–9），该条件下，酶活回收率可达86.18%（S–8）和96.99%（NKA–9）。比较得知，京尼平固定化酶的pH 稳定性、热稳定性、操作稳定性和储存稳定性均比戊二醛固定化酶高。 再次，采用氧化硅涂层法和离子液体涂覆法对吸附固定化酶进行包埋，且这两种方法均可成功应用在处理商品酶N435 上。实验证明，采用吸附法与氧化硅涂层或离子液体涂覆相结合制备固定化酶，方法简单，经济可行，且提高了固定化酶的机械稳定性、有机溶剂耐受性、储存稳定性，特别是重复使用性。 最后，采用无载体固定化技术制备交联Candida sp.99-125 脂肪酶聚集体，以10 mL 饱和硫酸铵溶液为沉淀剂，20 ℃沉淀5 mL 酶原液（12.09 U/mL，pH 8.0）20 min，得脂肪酶聚集体；加入4 mL，pH 6.0，0.25%的京尼平溶液，20 ℃交联5 h，得交联脂肪酶聚集体，其水解酶活力达771.06 U/g，酶活回收率达75.25%。添加适量PEI 与Candida sp.99-125 脂肪酶共沉淀制备P/CLEAs，酶活力达884.75 U/g，酶活回收率达86.34%。利用PEI的诱导作用，在P/CLEAs 表面形成氧化硅涂层，结果表明，Coated-CLEAs 大大提高了固定化酶的稳定性，特别是在对抗蛋白酶水解、耐受有机溶剂、重复利用及防止酶泄漏方面的效果很好。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第一章 文献综述

第二章 物理吸附法固定假丝酵母Candida sp.99-125 脂肪酶

第三章 京尼平在固定化脂肪酶中的应用

第四章 吸附包埋结合法固定假丝酵母Candida sp.99-125 脂肪酶

第五章 CLEAs 技术与仿生硅化相结合固定假丝酵母Candidasp.99-125 脂肪酶

第六章 结论

参考文献

附录

致 谢

攻读学位期间所取得的相关科研成果