IDO抑制剂联合运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌抗乳腺癌的作用

摘要

背景： 乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤，由于其发生原因的多样性，单一的治疗方法对其效果有限，因此我们期望找到一种有效的联合治疗方案。研究发现，吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine2,3-Dioxygenase，IDO）是一种具有免疫抑制作用的色氨酸代谢途径的限速酶，抑制IDO的表达能够有效提高机体的抗肿瘤免疫反应。Stat3做为一种信号转导子和转录活化子家族成员，已经被证实在多种肿瘤中高表达，促进肿瘤的进展，抑制机体抗肿瘤免疫反应，同时提高了IDO的表达。RNAi技术能够通过长度为21-25nt的双链小干扰RNA，特异地降解靶目标RNA，阻断其对应蛋白的合成。因此我们设想利用RNAi技术抑制Stat3，同时联合IDO抑制剂研究其对小鼠乳腺癌的治疗作用。 目的： 探索IDO抑制剂联合运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌是否能够提高乳腺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫作用。 方法： EMT-6乳腺癌细胞皮下接种于Balb/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型，随机的分为以下5组：模型组（PBS）、IDO抑制剂组（D-MT）、运载Scramble-siRNA减毒沙门氏菌组(Scramble-siRNA)、运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌组(Stat3-siRNA)、IDO抑制剂+运载Stat3-siRNA减毒沙门氏菌组(D-MT+Stat3-siRNA)。IDO抑制剂腹腔给药、1天1次、持续给药1周，运载干扰片段的减毒沙门氏菌组瘤内注射、1周给药1次、治疗2周。治疗结束后，肿瘤称重，比较各组小鼠肿瘤大小；免疫蛋白印迹（Western blot，WB）检测荷瘤小鼠肿瘤组织免疫相关蛋白CD8+T淋巴细胞的表达；免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测肿瘤中CD8+T淋巴细胞浸润的情况；HE（haematoxylin-eosin，HE）染色检测模型组乳腺癌荷瘤小鼠与不同治疗组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织，对比其细胞凋亡情况；流式：取模型组和不同治疗组乳腺癌荷瘤小鼠的脾脏组织，检测CD3、CD4、CD8、NK等免疫相关指标。 结果： 1.肿瘤对比结果显示，不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤大小相比，发现在治疗结束后，联合组明显抑制肿瘤的生长； 2.HE染色结果显示，不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织相比，发现治疗组中尤其是联合治疗组的小鼠肿瘤组织中出现大量的凋亡细胞； 3.Western结果显示，不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织相比，发现联合治疗组的小鼠中CD8表达升高、MMP2表达降低； 4.流式结果显示，不同治疗组与模型组乳腺癌荷瘤小鼠脾脏组织中CD3、CD4、CD8、NK1.1等指标相比，发现联合组中NK1.1含量最高，以及CD3标记后的CD4、CD8表达量也是最高。 结论： IDO抑制剂联合Stat3-siRNA治疗可显著抑制乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长，其机制可能通过提高免疫细胞的数量。

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