TLR9/MyD88对溃疡性结肠炎患者外周血TNF-α、IL-6及信号转导通路的影响

摘要

目的：
　　通过检测不同程度溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）及正常人外周血内TLR9、MyD88、IL-6和TNF-α表达水平的差异，以探讨TLR9对MyD88介导的信号转导通路及IL-6、TNF-α的影响，及上述各因子与UC病情活动度的关系。
　　方法：
　　采用 RT-PCR方法检测不同程度 UC患者及正常对照组外周血 TLR9和MyD88mRNA的表达水平；酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中IL-6和TNF-α蛋白表达水平。分别比较活动期UC患者与缓解期、正常对照组TLR9、MyD88、IL-6和TNF-α表达水平的差异；比较缓解期患者与正常对照组的差异；比较重度UC患者与轻、中度患者外周血中TLR9、MyD88、IL-6和TNF-α水平的差异。
　　实验数据用 SPSS13.0统计软件包进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，数据采用单因素方差分析中的SNK-q检验，卡方检验处理，两组间两两比较采用t检验。各因子之间的相关性采用Pearson相关分析，与病情活动度的相关性采用Spearman等级相关分析；结果以p<0.05作为有统计学意义的判断标准。
　　结果：
　　1、RT-PCR结果：活动期 UC患者外周血淋巴细胞中 TLR9mRNA和MyD88mRNA表达水平高于缓解期和正常对照组，差异有统计学意义（p<0.05）；缓解期患者与正常对照组相比差异无统计学意义（p>0.05）；重度 UC患者外周血中 TLR9mRNA和 MyD88 mRNA表达水平高于轻、中度组，差异有统计学意义（p<0.05）。TLR9mRNA和MyD88mRNA表达水平之间关系采用Pearson相关分析各因子之间的相关性得出：TLR9、MyD88的mRNA表达水平呈正相关r=0.806， p<0.01；采用Spearman分析TLR9和MyD88的mRNA分别与UC的活动程度成正相关：TLR9rs=0.810 p<0.01，MyD88 rs=0.799 p<0.01。
　　2、ELISA结果：活动期UC患者血清中TNF-α和IL-6的蛋白表达水平分别与缓解期、正常对照组相比，差异有统计学意义（p<0.05），缓解期与对照组相比，差异无统计学意义（p>0.05）；重度UC患者血清中TNF-α和IL-6表达水平高于轻、中度组，差异有统计学意义（p<0.05）。采用 Pearson相关分析，分析 TNF-α和 IL-6蛋白表达水平之间的相关性得出 rs=0.834 p<0.01；采用 Spearman分析TNF-α和IL-6与UC的活动程度正相关：TNF-α：rs=0.820 p<0.01，IL-6：rs=0.879 p<0.01。
　　结论：
　　1. TLR9、Myd88、IL-6和TNF-α四者之间在UC外周血中的表达呈显著正相关，TLR9可能通过介导 Myd88引发信号通路下游的基因表达，从而导致炎症因子的释放。
　　2. UC患者外周血中TLR9、MyD88、IL-6和TNF-α表达较缓解期及正常对照组明显升高，且与UC的严重程度呈正相关，提示其与UC患者病情的活动度有关。

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1实验材料

1.1实验对象：

1.2 病例选择及分期标准

1.3 标本采集：

1.4 主要仪器及设备

1.5主要试剂

1.6实验器具的去酶处理与准备

1.7 RT-PCR检测相关试剂配制

2实验方法

2.1 RT-PCR法

2.2 ELISA法

3. 统计学分析

结果

1．一般资料

2. RT-PCR结果

2.1.总RNA完整性及纯度的鉴定结果

2.2目的产物凝胶电泳结果

3.ELISA检测结果

3.1.UC患者不同病情TNF-α和IL-6的表达水平

3.2 不同严重程度UC患者的血清中TNF-α和IL-6表达水平的比较

4．相关性分析

4.1各个分子之间的相关性

4.2 TLR9、MyD88、TNF-α及IL-6与UC活动程度相关性

讨论

一．TLR9和MyD88 在UC中的表达

二．促炎因子TNF-α、IL-6 在UC中的表达

结论

参考文献

致谢

附录A缩 略 词 表

附录B 炎症性肠病与TLR/MyD88信号通路研究进展