缺血性心肌病心力衰竭患者特征性血清多肽谱图建立及标志物研究

摘要

血清多肽谱图是指通过质谱分析技术获得血清中多肽组精确分子量的谱图，是在临床中研究疾病蛋白质组学的重要方法之一，借助生物质谱技术分析氨基酸序列，发现疾病标志物，对疾病的早期诊断、药物作用靶点、发病机制的研究有着重要的临床意义。血清多肽谱图中用分子量形式表示多肽峰，也可经过血清再富集进一步通过串联质谱分析多肽序列，以鉴定多肽的疾病标志物。运用血清多肽谱图技术进行早期诊断，可明显提高病人的生存时间，降低病人的死亡率，同时对患者的愈后及生存意义也具有里程碑意义。本论文研究稳定有效地富集血清样品中的多肽成分，并利用弱阳离子交换磁珠体系和质谱技术检测缺血性心肌病心力衰竭患者的血清多肽谱图，通过专用生物信息学软件分析其特征性标志峰，在此基础上提出多肽谱图诊断缺血性心肌病心力衰竭患者的数据标准，为缺血性心肌病心力衰竭患者的诊断和鉴别诊断提供依据。
　　【目的】：探讨缺血性心肌病（ICM）心力衰竭患者和正常健康对照者之间的血清中蛋白谱表达差异，寻找标志性的差异多肽，预测差异蛋白的氨基酸序列及其前体蛋白，初步探讨其中差异蛋白与缺血性心肌病合并心力衰竭的关系，建立特异的缺血性心肌病心力衰竭患者血清多肽谱诊断模型，寻找ICM心力衰竭患者的特异性血清标志物。
　　【方法】：收集缺血性心肌病心力衰竭患者以及正常对照组的血清标本，通过特异的液体磁珠分选后，进行MALDI－TOF-MS的分析得到缺血性心肌病心力衰竭患者的血清多肽谱，采用专用的生物信息学分析软件Clinprot tools2.1，运用不同统计学，如GA、SNN、QC进行差异分析，最后运用遗传算法建立缺血性心肌病心力衰竭患者诊断的血清多肽谱模型。
　　【结果】：通过磁珠提取结合质谱检测技术对缺血性心肌病心力衰竭患者和正常对照组血清样本进行分析，一共可以检测到多肽峰139个，其中检测出缺血性心肌病心力衰竭患者和正常对照组间差异表达的蛋白峰有47个（n=47），选取其中有统计差异显著的蛋白峰1866.17Da、2660.54Da、7761.49Da、1848.81Da、2037.57Da建立缺血性心肌病心力衰竭患者的诊断模型，其中1866.17Da、7761.49Da、1848.81Da、2037.57Da在疾病组低表达；2660.54Da在疾病组高表达；该模型对缺血性心肌病心力衰竭患者的识别率100％,预测能力97.49％，其中显著性差异峰串联质谱鉴定出为HSP60蛋白的碎片序列，具有心肌保护作用,能阻碍心肌细胞凋亡、保护缺血时心肌细胞微管和肌动蛋白骨架。
　　【结论】：缺血性心肌病心力衰竭患者与正常对照组的血清间存在蛋白表达的差异，建立的特异的血清多肽谱诊断模型在缺血性心肌病心力衰竭患者的诊断和鉴别诊断中有一定的应用前景，为寻找缺血性心肌病合并心力衰竭患者特异的的血清标志物提供了一定的依据。

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第 1 章 综 述

1.1 血清蛋白质组学研究的技术方法

1.2 心血管疾病的血清蛋白质组学研究

1.3 结语

第 2 章 临床研究

2.1 前言

2.2 材料与方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

参考文献

致谢