环孢素所致小鼠急性肝损伤模型的建立及保肝解毒颗粒对其干预作用的研究

摘要

[目的]探索应用环孢素建立小鼠急性肝损伤模型的相对合适剂量及时间，并探讨环孢素所致小鼠急性肝损伤的发病机理及保肝解毒颗粒对其的干预机制。 [方法](1)昆明种小鼠50只，随机分为正常、低倍、中倍、高倍剂量造模组和空白对照组5组，每组10只。造模各组分别以环孢素0.054g/kg，0.270g/kg，0.540g/kg，0.8l0g/kg的剂量灌胃1次。检测血清ALT、AST，并做肝组织病理形态学观察。(2)昆明种小鼠90只，随机分为空白对照1组，模型组、甘利欣对照组各4组，分别于造模后18、36、54、72小时处死。阳性对照组造模前连续5天以甘利欣75mg/kg的混悬液按0.2ml/10g剂量灌胃，模型组和空白对照组给以同剂量的蒸溜水灌胃，最后一次灌胃后禁食12小时，模型组、阳性对照组以环孢素540mg/kg剂量灌胃1次。处死前分别禁食(不禁水)16小时。空白对照组给以等体积的生理盐水灌胃。检测血清ALT，并做肝组织病理形态学观察。(3)昆明种小鼠60只，随机分为模型组，保肝解毒颗粒大、中、小剂量组，甘利欣对照组和空白对照组。造模前连续5天大、中、小剂量组、阳性对照组分别以保肝解毒颗粒21.6g/kg，10.8g/kg，5.4g/kg、甘利欣75mg/kg灌胃。除空白组外，各组以环孢素540mg/kg剂量灌胃1次。分别检测血清ALT、AST、SOD、MDA、GSH-PX、IL-18，观察肝组织普通病理形态学和电镜下肝细胞超微结构变化，并应用TUNEL法检测肝细胞凋亡。 [结果](1)应用环孢素灌胃后，小鼠在540mg/kg剂量出现ALT、AST明显升高，与空白组比较有显著意义(P＜0.05)，肝细胞病变以浊肿为主，肝窦部分消失。(2)应用540mg/kg剂量的环孢素灌胃时，小鼠在18小时出现ALT明显升高，与空白组比较有显著意义(P＜0.05)，肝细胞出现明显的损伤病理改变。36、54、72小时组小鼠ALT继续升高，肝细胞损伤病理改变严重，死亡率逐渐提高。(3)模型组小鼠血清ALT、AST、MDA水平明显升高，SOD和GSH-PX水平明显降低(P＜0.05)。各剂量保肝解毒颗粒及甘利欣均可有效降低小鼠血清ALT、AST、MDA水平，显著提高SOD和GSH-PX水平，与模型组比较均有显著的统计学意义(P＜0.05)。(4)环孢素可使小鼠血清IL-18水平显著降低，与空白组比较有显著的统计学意义(＜0.05)。各剂量保肝解毒颗粒及甘利欣在提高小鼠血清IL-18水平方面与模型组比较均无显著的统计学意义(P＞0.05)。(5)环孢素模型组小鼠肝细胞变性程度严重，保肝解毒颗粒各剂量及甘利欣组小鼠肝细胞变性程度均有所改善，其中尤以大、中剂量组和甘利欣组效果最佳。(6)环孢素能够诱导小鼠肝细胞发生凋亡，保肝解毒各剂量组均可使环孢素所致DILI小鼠肝细胞凋亡程度有所减轻，其中尤以大、中剂量效佳。(7)模型组小鼠肝细胞内可见大量脂滴；线粒体有的较丰富，有的明显减少，线粒体嵴部分变短或消失，嵴间腔扩大，内质网有水肿现象和核糖体脱离现象，呈囊泡状或囊带状；高尔基体呈囊泡状或囊带状；细胞核常染色质增多，异染色质减少。保肝解毒颗粒各剂量和甘利欣组均可使肝细胞超微结构得到不同程度的恢复，尤以大、中剂量组效果最佳。 [结论]应用环孢素灌胃造成小鼠急性肝损伤的相对合适剂量为540mg/kg，相对合适时间为18小时。环孢素对肝细胞造成损伤的主要病理变化为肝细胞脂肪变性，还可影响肝细胞的能量及蛋白代谢。环孢素致小鼠急性肝损伤发生机理与自由基脂质过氧化反应和细胞凋亡关系密切。 湿热毒蕴、肝脾不和是DILI的基本病机，清热除湿解毒、调肝健脾和胃是治疗DILI的根本大法。保肝解毒颗粒具有清热燥湿、凉肝解毒、疏肝理气、健脾和胃之功效，是防治DILI行之有效的中药制剂。 保肝解毒颗粒可有效降低环孢素致DILI小鼠血清ALT、AST、MDA水平，显著升高SOD和GSH-PX水平，不同程度地使肝细胞损伤、凋亡和肝细胞超微结构变化得到改善。保肝解毒颗粒对抗急性DILI的作用机理主要与其抗脂质过氧化反应、免疫调节和抑制肝细胞凋亡等有关，而与肝细胞核酸代谢影响关系不大。

目录

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摘要

前言

实验1环孢素所致小鼠急性肝损伤模型的建立(造模剂量研究)

实验2环孢素所致小鼠急性肝损伤模型的建立(造模时间研究)

实验3保肝解毒颗粒对环孢素致急性药物性肝损伤小鼠模型干预机制的研究

分析与讨论

结论

致谢

参考文献

附录1病理照片

附录2文献综述药物性肝病发生机制及中医药防治的研究进展