补益、活血、清热及其合方抑制人胰腺癌细胞PC-3IGF-1αR-PLD-PKCα信号转导作用的研究

摘要

目的：通过观察补益、活血、清热及其合方抑制人胰腺癌细胞PC-3增殖和IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导通路的影响，研究补益、活血、清热及其合方治疗胰腺癌的作用机理，探讨正虚、血瘀、热毒与胰腺癌病变和IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导的关系，进一步揭示胰腺癌的中医病机本质，为临床上治疗胰腺癌提供有效方药。 方法：采用人胰腺癌PC-3细胞为实验对象，以MTT法从候选中药中筛选出抑制胰腺癌细胞的最佳药物，根据正交试验优选出疗效最好的方剂，将对照组和补益、活血、清热及其各个合方组作用于细胞，在倒置显微镜下观察PC-3细胞形态的改变，并用Western blot检测对PC-3细胞IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导通路各蛋白表达的影响。 结果：1.补益、活血、清热及其合方对PC-3细胞增殖明显抑制，影响其形态特征改变。显微镜下观察补益组细胞皱缩，呈长条形，细胞间隙加大；活血组细胞表面粗糙，胞质内充满颗粒状或空泡样物质，细胞碎片少；清热组细胞可见细胞皱缩，透光度减小，形态不规则，细胞间基质呈现丝网状，贴壁性变差；合方组为前三组相兼形态表现，细胞表面粗糙，皿中有较多的细胞碎片；2.补益、活血、清热及其合方均能抑制PC-3细胞生长，且活血组作用最强。各组随药物浓度的增加，抑制率逐渐增强，呈量效依赖关系；3.人胰腺癌PC-3细胞可检测到IGF-1αR-PLD-PKCa蛋白分子的过度表达；4.当用IC50药物剂量处理细胞时，补益、活血、清热及其合方均能抑制IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导通路各蛋白表达水平，其作用强弱依次为：合方组>清热组>活血组>清热活血组。 结论：1.补益、活血、清热及其合方均能明显抑制人胰腺癌PC-3细胞的生长，清热和合方组效果较好，表明清热治法在胰腺癌的中医病机中起着重要的作用；2.胰腺癌发病和IGF-1αR-PLD-PKCa转导通路信号增强密切相关；3.补益、活血、清热及其合方均能下调人胰腺癌PC-3细胞IGF-1αR-PLD-PKCa信号通路各蛋白表达水平，该方抑制IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导是其抑制人胰腺癌细胞增殖的部分机理；4.在胰腺癌病变中，正虚、血瘀、热毒与IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导表达增强密切相关；5.清热解毒、活血化瘀、扶正培本合用是中医药防治胰腺癌的重要治法。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1实验材料

2实验方法

3统计学处理

结果

1 6种中药抑制PC-3细胞增殖的量效关系

2正交试验确定药物最佳组合

3补益、活血、清热及其合方抑制PC-3细胞增殖的量效关系

4补益、活血、清热及其合方对PC-3细胞形态学的影响

5补益、活血、清热及其合方对IGF-1αR表达的作用

6补益、活血、清热及其合方对PLD表达的作用

7补益、活血、清热及其合方对PKCα表达的作用

讨论

1 IGF-1αR-PLD-PKCα信号转导与肿瘤增殖的关系

2补益活血清热及其合方对PC-3细胞生长及IGF-1αR-PLD-PKCα信号转导的抑制作用

3正虚、血瘀、热毒在胰腺癌中的作用

4补益活血清热方方义分析

结论

致谢

参考文献

附录