针灸对CTX小鼠骨髓有核细胞DNA含量、细胞周期、细胞凋亡的影响

摘要

目的 本课题采用环磷酰胺(CTX)腹腔注射造成昆明种小鼠白细胞减少的模型，通过对外周白细胞计数、骨髓有核细胞DNA含量、各系细胞周期、细胞凋亡指数等指标的检测，进而从分子生物学的层次来探讨针刺、艾灸的方法对化疗后小鼠造血功能的保护机理。 方法 把实验小鼠随机分为模型组、针刺组、艾灸组、正常组。对模型组、针刺组、艾灸组小鼠通过腹腔注射环磷酰胺(CTX)100mg/kg/d，连续3天，第3天停药后4小时即造出昆明种小鼠的白细胞减少模型。正常组腹腔注射同体积生理盐水，连续3天，按照造模时间的先后顺序，在停药后4小时模型即成。造模结束后4小时针刺组、艾灸组按造模顺序进行治疗。选用穴位有“大椎”、“膈俞”、“肾俞”、“足三里”。针刺组用28号1寸针灸进行针刺，进针0.2～0.3mm，行平补平泻，留针10mm，每日1次，连续5天；艾灸组用自制艾炷灸，每天1次，每次每穴4壮，连续5天。模型组、正常组陪同固定。模型组、针刺组、艾灸组中各组分2批，每批8只，在治疗的第52小时(第3天)、第100小时(第5天)，按治疗时间的先后顺序，分2批随机处死小鼠取材。分别用自动生化分析仪和流式细胞仪进行外周血白细胞计数、骨髓有核细胞DNA含量、各系细胞周期、细胞凋亡指数等指标的检测。 结果 1对外周血白细胞的影响：在治疗第3天、第5天后针刺组、艾灸组与模型组比较P<0.01和P<0.001，统计学处理有差异和显著性差异；针刺组与艾灸组比较P<0.05，有统计学差异；说明针刺组和艾灸组可以提高外周血白细胞数量，并且艾灸组优于针刺组。 2对骨髓有核细胞DNA含量的影响：通过对实验结果中DNA含量进行统计对比，显示模型组显著低于正常组(P<0.001)，说明腹腔注射环磷酰胺可以造成小鼠骨髓有核细胞DNA含量水平的显著下降；针刺组：艾灸组与模型组比较P<0.05和P<0.01，差别有显著性意义；针刺组、艾灸组第3天与第5天比较P<0.05，统计学处理有意义，说明针刺和艾灸治疗均可以升高骨髓有核细胞的DNA含量，并且在一定的治疗时段内随着治疗次数的增加效果会相应增加；针刺组与艾灸组比较P<0.05，统计学处理有意义，说明艾灸组在疗效上要优于针刺组。 3对骨髓有核细胞细胞周期的影响：对骨髓有核细胞G<,1>期的数据进行统计显示，正常组与模型组比较P<0.001，统计学处理有极显著性差异，说明腹腔注射环磷酰胺可以造成小鼠骨髓有核细胞G<,1>期阻滞；针刺组、艾灸组与模型组比较P<0.05和P<0.01，统计学处理有差异和显著性差异，说明针刺组和艾灸组可以显著降低骨髓细胞G<,1>期的时相，并且艾灸组优于针刺组；对G<,2>、S期的数据进行统计，针刺组、艾灸组与模型组比较P<0.01和P<0.001，统计学处理有显著性差异和极显著性差异；针刺组与艾灸组比较P<0.05，两组在统计学处理上有差异；说明针刺组和艾灸组均可以显著升高处于S期的骨髓细胞分裂水平，并且艾灸组优于针刺组。 4对骨髓有核细胞凋亡的影响：在本次实验中虽然只有少量标本测到了细胞的凋亡峰，但由于同批次实验小鼠骨髓中出现了凋亡调节蛋白bcl-2、bax，正常组、艾灸组、针刺组和模型组比较均有极显著差异，说明针灸能减轻化疗药物所致的细胞凋亡。虽然凋亡细胞数目较少，但结合免疫组化法检测到p53蛋白表达数量较多，提示针灸减轻骨髓抑制，提升白细胞数量的作用机制可能主要通过细胞DNA修复来实现。 结论总之，本研究结果表明针刺和艾灸确实可以显著改善环磷酰胺所致小鼠白细胞减少的骨髓抑制状况，并且是通过对骨髓有核细胞DNA含量、细胞周期的良性调节来实现。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1实验材料

1.1实验动物

1.2主要实验药品、试剂、器材

1.3主要仪器设备

1.4其它实验用品

1.5主要试剂的配制

2实验方法及步骤

2.1动物分组

2.2编号及治疗前处理

2.3造模方法

2.4取穴及治疗

2.5材料处理

2.6观察指标和方法

3统计学处理

结果

1针灸对化疗小鼠外周血白细胞的影响

2针灸对化疗小鼠骨髓细胞DNA含量的影响

3针灸对化疗小鼠骨髓细胞周期的影响

4针灸对化疗小鼠骨髓细胞细胞凋亡的影响

理论探讨

1祖国医学对有关白细胞减少症的认识

2组方选穴依据

3导师对放化疗所致白细胞减少症的认识及研究

4现代医学对白细胞减少症的研究

4.1白细胞与骨髓造血系统关系的研究

4.2烷化剂环磷酰胺(CTX)的药理机制

5组方选穴与选用指标依据

5.1穴位选用依据

5.2选用指标依据

6实验结果分析及作用机制探讨

6.1针灸对外周血白细胞的影响

6.2针灸对骨髓细胞细胞DNA含量的影响

6.3针灸对骨髓细胞细胞周期的影响

6.4针灸对骨髓细胞细胞凋亡的影响

结论

致谢

参考文献

附录