氧化苦参碱对裸鼠皮下移植性胃癌抑制作用及机制的实验研究

摘要

目的: 本题目主要研究氧化苦参碱对人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用，并初步探讨其在裸鼠体内抗肿瘤作用的机制，为临床运用氧化苦参碱治疗胃癌提供一定的理论依据。 材料与方法： 1．人胃癌MGC-803细胞由郑州大学公共卫生学院王凯娟教授馈赠；BALB/cA-nu鼠购自中国药品生物制品检定所实验动物中心，合格证编号：SCXK(京)2005-0004；氧化苦参碱为北京显通时代医药科技发展有限公司产品。 2．调整人胃癌MGC-803细胞浓度为1×107/ml，以0.2ml/只注射于每只裸鼠右侧腋窝皮下，复制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤模型。 3．选取裸鼠移植瘤体积达到100-300mm3的裸鼠进行实验，将裸鼠随机分为5组：阴性对照组(NS)、阳性对照组(5-FU)、氧化苦参碱小、中、大剂量组(oxymatrine，OXY)，每组不少于6只。每日一次按公斤体重给药，分别腹腔注射等体积的NS、5-FU 50mg/kg、OXY 64mg/kg、OXY 128mg/kg、OXY 256mg/kg。观察裸鼠移植瘤的生长情况，绘制其生长曲线图，计算OXY对裸鼠移植瘤体积的平均抑制率(inhibition rate,LR％)，共观察25天。 4．实验结束时，脱颈椎处死裸鼠，剥离裸鼠移植瘤，分为三份：一份用中性福尔马林固定，病理切片HE染色，光学显微镜下观察OXY对裸鼠移植瘤病理形态学改变的影响，并做脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TDT-mediated dUTP nick end labelling，TUNEL)染色来检测裸鼠移植瘤细胞的凋亡，计算其凋亡指数(apoptosis index，AI)；一份用Carnoy氏液固定，病理切片Feulgen染色，光学显微镜下观察OXY对裸鼠移植瘤细胞增殖情况的影响：一份用70％酒精固定，用于流式细胞仪检测裸鼠移植瘤细胞Bcl-2和Bax的表达。 结果： 1．裸鼠皮下移植瘤生长动力学研究结果显示：OXY具有抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用。至实验结束时，OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤平均体积分别为851.41±287.30mm3，683.48±284.77 mm3，450.80±166.70 mm3，与阴性对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)；OXY小、中、大剂量对裸鼠移植瘤体积的平均抑制率分别为29.75％、36.50％、43.20％。 2．裸鼠皮下移植瘤病理形态学观察结果：光学显微镜下见OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞均发生不同程度的坏死，以大剂量组最为明显，高倍镜下见为红染的无结构物质。 3．裸鼠皮下移植瘤细胞Feulgen染色结果：光学显微镜下见OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞核均较阴性对照组的小、数目少、染色淡。 4．裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的检测结果：病理切片TUNEL染色光学显微镜下见OXY中、大剂量组均有明显的裸鼠移植瘤细胞凋亡，其AI分别为18.29±3.70和12.09±2.36，与阴性对照组比较差异均具有显著的统计学意义(P<0.01)。而OXY小剂量组与阴性对照组比较差异则无统计学意义(P>0.05)；流式细胞仪检测结果显示：OXY小、中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2的表达均较阴性对照组降低，而Bax的表达则升高。经统计学处理，与阴性对照组相比，OXY小剂量组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2的表达差异无统计学意义(P>0.05)，而Bax的表达差异则具有统计学意义(P=0.017<0.05)；OXY中、大剂量组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2的表达差异具有统计学意义(P=0.012<0.05)，而其Bax的表达差异则具有显著的统计学意义(P=0.003，0.002<0.01)。 结论： 1．氧化苦参碱可以抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。 2．氧化苦参碱抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用，主要表现在促进移植瘤细胞凋亡、抑制其增殖和对其直接杀伤三个方面。 3．氧化苦参碱促进人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的机制为下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达，上调细胞凋亡活性基因Bax的表达。 4．为临床运用氧化苦参碱治疗胃癌提供了一定的理论依据。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 裸鼠皮下移植瘤生长动力学研究结果

2 裸鼠皮下移植瘤病理形态学观察结果

3 裸鼠皮下移植瘤细胞Feulgen染色结果

4 裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡的检测结果

讨论

1 氧化苦参碱抑制裸鼠皮下移植瘤生长的作用

2 氧化苦参碱对裸鼠皮下移植瘤细胞的细胞毒作用

3 氧化苦参碱对裸鼠皮下移植瘤细胞增殖的抑制

4 氧化苦参碱促进裸鼠皮下移植瘤细胞的凋亡

5 工作展望

结论

致谢

参考文献

附录