乙醛脱氢酶1作为喉癌Hep-2细胞系肿瘤干细胞标志物的实验研究及初步临床分析

摘要

第一部分 ALDH1在喉癌Hep-2细胞系中的表达及ALDH1不同亚群细胞的体外增殖及分化能力实验
　　目的：探讨乙醛脱氢酶1（aldehyde dehydrogenase1,ALDH1）在人喉癌Hep-2细胞系中的表达,观察ALDH1不同亚群肿瘤细胞的体外生长特性。
　　方法：应用荧光细胞化学染色及流式细胞术，观察和检测喉癌Hep-2细胞系中的ALDH1的表达；应用流式分选术分离ALDH1br亚群细胞, MTT法检测ALDH1不同亚群细胞增殖能力，动态流式检测ALDH1br亚群体外分化能力。
　　结果：喉癌 Hep-2细胞系中 ALDH1呈不同程度表达，其中有2.9±0.6％的细胞ALDH1呈高表达；MTT法示ALDH1br亚群的增殖能力高于ALDH1low亚群和未分选细胞；在含血清的培养液中，经过6天培养，ALDH1br亚群细胞由最初分选后的94.2±3.8%下降至分选前水平。
　　结论：喉癌Hep-2细胞系中, ALDH1br亚群细胞比例较少，ALDH1br亚群细胞具有强的体外分化和增殖能力。
　　第二部分 ALDH1br亚群细胞、ALDH1low亚群细胞和未分选细胞的体内成瘤能力检测
　　目的：检测 ALDH1不同表达亚群细胞的体内成瘤能力，确立 ALDH1为喉癌Hep-2细胞系肿瘤干细胞标志物。
　　方法：将分选后的各亚群细胞进行培养，HE染色观察不同亚群细胞的生长情况；流式细胞仪检测ALDH1br亚群细胞和ALDH1low亚群细胞的细胞周期分布情况；三组细胞以5×104数量级注入裸鼠肩项部皮下，观察各组的成瘤情况。
　　结果：分选后的各组细胞生长状态相似，具有肿瘤细胞基本生长形态；各组细胞的细胞周期分布无差异；ALDH1br亚群细胞的致瘤时间短，肿瘤生长速度快于其他两组，具有统计学差异（P＜0.05）。
　　结论： ALDH1br亚群细胞与 ALDH1low亚群细胞和未分选细胞相比，具有强的成瘤能力；ALDH1可以作为喉癌Hep-2细胞系肿瘤干细胞标志物。
　　第三部分乙醛脱氢酶1在喉癌组织中的表达及临床病理意义
　　目的探讨乙醛脱氢酶1在喉癌组织中的表达及临床病理意义。
　　方法采用免疫组化Elivision法对2004年1月~2006年12月间我院收治的86例喉癌患者的喉癌组织及其正常喉组织进行ALDH1检测，结合临床病理特征进行相关性分析。
　　结果 ALDH1在喉正常组织中不表达或低表达，在喉癌组织中不同程度表达，其中高表达25例，ALDH1的表达与患者年龄、喉癌的部位、浸润范围、临床分期无明显相关性（P>0.05）；有淋巴结转移患者ALDH1表达高于淋巴结阴性患者，具有统计学意义（P<0.05）；5年生存率ALDH1阳性患者明显低于ALDH1阴性患者（P<0.05）。
　　结论： ALDH1在喉癌组织中的高表达与淋巴结转移有关，且可以作为喉癌预后的重要因素，对喉癌预后进行评价。

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前言

参考文献

第一部分 ALDH1在喉癌Hep-2细胞系中的表达及ALDH1不同亚群细胞的体外增殖及分化能力实验

摘要

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材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

附图

第二部分 ALDH1br亚群细胞、ALDH1low亚群细胞和未分选细胞的体内成瘤能力检测

摘要

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材料与方法

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结论

参考文献

附图

第三部分 乙醛脱氢酶1在喉癌组织中的表达及临床病理意义

摘要

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前言

材料与方法

结果

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结论

参考文献

附图

致谢

附录A英文词汇对照表

附录B个人简历及发表论文

附录C 综述： 肿瘤干细胞及其标志物研究现状